DAPI染色流程
DAPI染色
1．原理
DAPI为4’，6二脒基-2-苯吲哚(4’，6―diamidino-2―phenylindole)能与双链DNA小槽，特别是AT碱基结合，也可插入少于3个连续AT碱基对的DNA序列中。当它与双链DNA结合时，荧光强度增强20倍，而与单链DNA结合则无荧光增强现象，因此是一种简易、快速和敏感地检测DNA的方法。DAPI的荧光强度虽较Hoechst低，但荧光稳定性优于Hoechst；其特异性较溴化乙啶(ethidlium bromide，EB)和碘化丙啶(propidium iodide，P1)高。
2．溶液配制
(1)0．01mol／L PBS(pH7．0)：取0．1mol／L NaH2PO4・H2O 34ml、0．1mol／LNa2HPO4 66ml、NaCl 0．9g，溶于900m1双蒸水；
(2)DAPI储存液：将0．5mgDAPI溶于5．0ml PBS中，分装，低温长期保存；
(3)DAPI工作液：用PBS稀释DAPI储存液，终浓度为0．1ug／ml。
3．染色程序
(1)培养的单层细胞(未固定)或新鲜组织的冰冻切片等，PBS漂洗5分钟；
(2)DAPI工作液室温染色5～20分钟(可根据实验材料的染色结果而定)；
(3)PBS漂洗；
(4)水溶性封片剂封片，游离细胞也可直接用含DAPI的PBS封片；
(5)荧光显微镜观察。
结果：正常的细胞核呈强荧光，细胞质无荧光；固定的组织细胞同样处理，亦可得到相似的染色结果。在有支原体污染的细胞质和细胞表面可见孤立的点状荧光，在感染痘苗病毒的细胞质中存在独特的“星状”荧光簇(star-like fluorescent clusters)，腺病毒感染早期胞质中也可出现荧光。
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