DAPI 简易细胞核形态染色试剂盒使用说明
主要用途
DAPI 简易细胞核形态染色试剂是一种旨在通过使用荧光染料 DAPI 与细胞核 DNA 特异性结合，并发出荧光检测信号，用于分析和观察细胞核形态或 DNA 含量以及双重染色或重叠染色定位的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞核（动物、人体、植物、昆虫等）的观察。产品即到即用，性能稳定，荧光清晰。
技术背景
作为细胞 DNA 染色剂之一的 4，6－二咪基－4-联苯基吲哚（4，6-diamidino-2-phenylindole；DAPI）特异性地与 DNA 双螺旋的凹槽部分发生相互作用，从而与 DNA 的双链紧密结合。结合后产生的荧光基团的吸收峰是 358nm 而散射峰是 461nm，正好是 UV（紫外光）的激发波长 356nm，使得 DAPI 成为一种常用的荧光检测信号，并作为双重染色或重叠染色的主要染色剂之一。
产品内容
染色液（Reagent A） | 毫升 |
产品说明书 | 1 份 |
保存方式 | |
保存 在－20℃冰箱里，避免光照；有效保证 6 月 | |
用户自备 | |
磷酸缓冲液（YJ12033.1）：用于清洗样品 | |
微型台式离心机：用于悬浮细胞的操作 | |
盖玻片：用于染色后封片 | |
荧光显微镜：用于观察细胞核 DNA 染色 | |
实验步骤 |
一、 贴壁细胞染色
1． 准备 1 个细胞培养 48 孔板的待测细胞，每孔铺满率达 70％
（注意：可以使用载玻片，载玻片培养皿，35mm 培养皿，和其它培养孔板，见注意事项 6）
2． 进行染色前清理、固着、通透等步骤
3． 小心抽掉预处理液体，空气中晾干
（注意：由此步骤开始，用户可以进行抗体荧光染色或其它荧光染色）
4． 小心加入 xx 微升 染色液（Reagent A），覆盖培养孔表面
5． 室温下孵育 10 分钟，避免光照
6． 小心抽掉 染色液（Reagent A）
7． 小心加入 xx 微升用户自备的磷酸缓冲盐溶液（PBS），覆盖培养孔表面
8． 即刻在倒置荧光显微镜下进行观察：激发波长 350nm，散发波长 460nm（细胞核呈现蓝色）
二、 悬浮细胞染色
1． 将悬浮细胞（1 X 106细胞）移入到 1.5 毫升离心管
2． 放进微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 300g（或 2000RPM，例如 eppendorf 5415）
3． 小心抽掉上清液
4． 进行染色前清理、固着、通透等步骤
5． 放进微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 300g（或 2000RPM，例如 eppendorf 5415）
6． 小心抽掉预处理液体
（注意：由此步骤开始，用户可以进行抗体荧光染色或其它荧光染色）
7． 小心加入 xx 微升 染色液（Reagent A），混匀细胞颗粒群
8． 室温下孵育 10 分钟，避免光照
9． 放进微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 300g（或 2000RPM，例如 eppendorf 5415）
10．小心抽掉 xx 微升 染色液（Reagent A）
11．小心加入 xx 微升用户自备的磷酸缓冲盐溶液（PBS），混匀细胞颗粒群
12．放进微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 300g（或 2000RPM，例如 eppendorf 5415）
13．小心抽掉上清液
14．小心加入 xx 微升用户自备的磷酸缓冲盐溶液（PBS），混匀细胞颗粒群
15．移出 xx 微升到载玻片上，放上盖玻片
16．即刻在荧光显微镜下进行观察：激发波长 350nm，散发波长 460nm（细胞核呈现蓝色）
三、 载玻片染色
1． 准备 1 个细胞载玻片
2． 进行染色前清理、固着、通透等步骤
（注意：由此步骤开始，用户可以进行抗体荧光染色或其它荧光染色）
3． 小心加上 xx 微升 染色液（Reagent A），覆盖载玻片表面
4． 室温下孵育 10 分钟，避免光照
5． 小心抽掉 xx 微升 染色液（Reagent A）
6． 小心加上 xx 微升用户自备的磷酸缓冲盐溶液（PBS），覆盖载玻片表面
7． 小心抽掉清理液
8． 盖上盖玻片
9． 即刻在荧光显微镜下进行观察：激发波长 350nm，散发波长 460nm（细胞核呈现蓝色）
注意事项
1． 本产品为 100 次操作
2． 本产品友好使用于双重染色或重叠染色
3． 染色液（Reagent A）为半通透性染料
4． 操作时须戴手套
5． 操作时，避免污染母液
6． 本产品适合各种规格的培养细胞：载玻片，载玻片培养皿，35mm 培养皿，和各种培养孔板，须相应调整试剂溶液：
操作容器 | 试剂溶液规格 |
载玻片 | 100 微升 |
载玻片培养皿 | 100 微升 |
35mm 培养皿 | 500 微升 |
96 孔培养板 | 50 微升 |
48 孔培养板 | 100 微升 |
24 孔培养板 | 200 微升 |
12 孔培养板 | 400 微升 |
6 孔培养板 | 500 微升 |
25cm2细胞培养瓶 | 1 毫升 |
7． 本产品可用于悬浮细胞或细胞脱离处理后染色
8． 本公司提供系列简易细胞核染色分析试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定荧光清晰
