反相色谱流动相的选择注意事项
在液质联用中,一般均使用极性溶剂进行洗脱。反相色谱中洗脱强度顺序为:水<甲醇<乙腈<乙醇≈丙酮,亲水作用色谱中洗脱强度顺序为:丙酮<乙腈<乙醇<甲醇<水。通常可以通过改变流动相的溶剂强度和类型来改善化合物的保留和选择性。
改变流动相洗脱能力通常会引起保留时间的改变,部分化合物可以此作为改善分离度的手段。但有些化合物通常是结构类似的化合物,不能通过改变溶剂强度而增加分离度,这时改变流动相的组分,例如,调整pH、添加缓冲盐或离子对试剂可能是个可行的选择。对于某些不能有效分离的化合物,使用两种混合溶剂(甲醇和乙腈)作为有机相,可能会得到不错的分离效果。
串联质谱在使用缓冲盐时需要考虑是否与质谱兼容,必须使用挥发性试剂。通常使用甲酸、乙酸、氨水作为pH调节剂,甲酸铵、乙酸铵作为缓冲盐,三氟乙酸和三乙胺作为离子对试剂。有以下几点需要注意。
(1)甲酸、乙酸、氨水与甲酸铵、乙酸铵一起使用具有最大的缓冲效率,注意盐在溶剂中的溶出度,防止析出。
(2)在负离子模式下加入酸,会抑制大部分化合物的质谱信号响应。
(3)在调节流动相pH前,必须充分了解所用色谱柱的pH范围,如超出,将大大降低色谱柱寿命。
(4)亲水作用色谱一般会使用5~50 mmol/L的盐,来达到改善峰形和保留的目的。
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