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免疫荧光标记技术的方法分类及技术特点

2022.11.16

根据抗原抗体反应的结合步聚的不同,免疫荧光标记技术可分为直接法、间接法、补体法和双重免疫荧光法四种。

直接法是将荧光素标记的特异性抗体直接与相应的抗原结合,以检查出相应的抗原成分。

间接法是先用特异性抗体与相应的抗原结合,洗去未结合的抗体,再用荧光素标记的抗特异性抗体(间接荧光抗体)与特异性抗体相结合,形成抗原一特异性抗体一间接荧光抗体的复合物。因为在形成的复合物上带有比直接法更多的荧光抗体,所以间接法要比直接法更灵敏一些。

补体法是用特异性的抗体和补体的混合液与标本上的抗原反应,补体就结合在抗原抗体复合物上,再用抗补体的荧光抗体与之相结合,就形成了抗原一抗体一补体一抗补体荧光抗体的复合物。荧光显微镜下所见到的发出荧光的部分即是抗原所在的部位。补体法灵敏度高,适用于各种不同种属来源的特异性抗体的标记显示。

在对同一组织细胞标本上需要检测两种抗原时,可进行双重荧光染色,即将两种特异性抗体(例如抗A和抗B)分别以发出不同颜色的荧光素进行标记,抗A抗体用异硫氰酸荧光素标记发出黄绿色荧光,抗B抗体用四甲基异硫氰酸罗明达标记发出橙红色荧光,将两将荧光抗体按适当比例混合后,加在标本上(直接法)就分别形成抗原抗体复合物,发出黄绿色荧光的即抗A抗体结合部位,发出橙红色荧光的即抗B抗体结合的部位,这样就明确显示出两种抗原的位置。

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