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沃课堂 | 液相故障排除之Alliance交叉污染
Alliance HPLC系统在使用过程中可能会遇到交叉污染的问题。
实验过程中需考虑样品、样品溶剂、流动相和试剂瓶等方面的影响，除此定期维护保养仪器、良好的实验习惯也是减少此类问题的关键。
使用质量可靠的试剂，使用超纯水时需每天更换，缓冲盐建议现配现用，同时避免使用容易附着在管路或色谱柱上的添加剂；
方法开发应考虑到流动相，洗针液以及样品溶剂之间的互溶性，尤其在梯度洗脱方法中，需考察流动相极性变化对样品溶解度的影响。此外，流动相的pH值也应该适用于整个色谱体系；
溶剂瓶，样品瓶等相关容器，应保持洁净，样品瓶建议一次性使用；
为预防仪器可能的交叉污染问题，建议定期维护保养仪器。日常也需养成良好的使用习惯，建议在开机后和进样完成后均进行进样针清洗的操作。
在2695的开机界面，选择“Diag”选项卡。
“Alliance系统的交叉污染问题排查方法
”1
检查洗针液是否合适
建议选择对样品溶解性比较好的试剂作为洗针溶液，但不含盐，尽量不要含酸或碱。
2
检查洗针液是否足够
仪器上绿色管路为洗针溶液入口管路，检查此管路对应的溶剂量是否足够，同时观察该管路是否在液面以下。
3
检查洗针功能是否正常
洗针功能正常时能听到洗针泵运行的声音，同时可以观察到黄色废液管有液体流出。
4
设置进样程序来判断污染源
进样（Inject Samples）：功能选择“进样”时，进任何体积进样针都有进样动作。
进直接样品（Inject Immediate Samples）：则没有进样动作，只记录当前色谱条件下的基线。
进样方式
有异常峰
有异常峰
有异常峰
进样0 µl
否是是
进直接样品
否否是
可能原因
样品溶剂污染
进样系统污染
流动相或色谱柱
5
进样系统污染，延长洗针时间
在仪器方法中，2695“通用（General）”界面修改洗针时间，有“正常、加倍、延长”三种选择：
正常（Normal）：方法中默认选项
加倍（Double）：两倍于正常时间
延长（Extended）：四倍于正常时间
6
延长洗针时间仍不能解决问题
可以清洗系统、自行更换针头清洗玻璃料垫圈（俗称“小抹布”），或由专业工程师更换seal pack等易损耗件。
常规反相系统清洗方法：
接二通，将所有管线（ A、 B、 C、D四路溶剂管路，柱塞杆清洗,洗针管路）都放入 50:50=甲醇: 水中
灌注柱塞杆清洗约1分钟；
灌注四路溶剂管线5-7分钟；
洗针和注射器各3-5次；
移取50%甲醇于液相小瓶中，放置在样品室，设置流速重复进样约30针；
还可以用异丙醇或30%磷酸清洗系统，用酸清洗后需用水将系统冲至中性，最后将系统保存在有机相中，例如甲醇。
更换针头清洗玻璃料垫图：在洗针液清洗针外壁后，由小抹布吸收多余的洗针液和可能残留在针外壁上的样品。如果“小抹布”过脏，也会引起进样时的交叉污染。更换前，先将备用玻璃料放在所使用的针头清洗溶剂或乙醇中浸泡几分钟。更换过程如下：
打开样品转盘门，取出样品盘，关闭分离单元的电源，拔下电源线；
找到下部玻璃料止动器，该止动器在样品室内的右上方，在腔体以内大约4英寸处；
从上向下看，顺时针方向用手拧松下部玻璃料止动器，用一直径较小的尖状物插入止动器盖的孔中，移除止动器中的玻璃料；
安装已浸泡且浸湿的新玻璃料，将其置于止动器中，重新安装下部止动器，用手拧紧；
将分离单元重新连接到电源插座，打开电源，重新放好样品盘，关上样品室门，清洗进样针。
