关于紫外可见光检测器,你需要了解这些知识点
大家如果是自己驾车,就会发现在大雾或大雨环境中,相同的距离下车头灯发出的光较正常天气的透过率变低,仿佛光被大雾或者大雨吸收了。
而且雾或雨越大,透过率就越低,光被吸收的越多。
这其实和紫外检测器基于的朗博比尔定律原理非常相似。
在紫外检测器中我们可以认为氘灯就是车头灯,而流通池就是开车的道路,流通池中的液体样品就是大雾或者大雨。
朗博比尔定律的表达式如下:
在这个公式中A是指吸光度,I是指透过光强度,I0是指入射光强度,T是指透过率。
也可以写成如下公式:
这里的b是指光程长度,光程长度越长,吸光度越强,也就是在开车时,大雾大雨天气下距离越远,可见度越低。
而c是指吸光物质的浓度,待测组分浓度越高吸光度越大,也就是大雾或大雨越大,能见度越低。
ε叫做摩尔吸光系数,它在固定波长下是个常数,能够影响它的是化合物的分子结构。
对于许多的有机化合物而言,分子中价电子的跃迁需要吸收波长在200-1000nm范围内的光。
而这恰好落在紫外可见光区域,这也是紫外可见光检测器名字的由来。
在有机化合物结构中,能够产生紫外吸收的大多是一些不饱和基团,我们把这些能够产生紫外吸收的基团称为生色团。
不同生色团的摩尔吸光系数是不同的,所以不同物质的吸光度不同,也就会影响该物质在紫外检测器中的灵敏度。
另外,还有些基团它们本身是不产生紫外吸收的,但是当它们和这些有紫外吸收的基团结合时,会引起吸收峰的位移以及吸收强度的改变,我们把这些基团称为助色团。
这也是为什么有些化学物质它们的生色团相同,但是紫外吸收波长不同,灵敏度也不同的原因。
另外,由于物质分子对不同波长处的光吸收程度不同,为了获得更高的灵敏度,我们就要选择一个最佳的紫外吸收波长处进行测定。
对于大多数的同学来说选择化合物的最佳紫外吸收波长可以通过文献或者网站查询。
或者有些实验室如果有二级管阵列检测器,通过全波长扫描,然后再用光谱软件分析,也可以寻找到合适化合物的紫外吸收波长。
但值得注意的是:选择化合物的紫外吸收波长应该避开流动相的截止波长20nm左右,避免流动相的干扰。
例如,对于常用的乙腈来说,它的截止波长是190nm,那么化合物的检测波长应该选择在210nm以上。
对于使用液相色谱的同学来说,紫外可见光检测器应该是最常用的一款检测器,它占了所有液相检测器使用率的70%左右。
为什么紫外检测器可以这样独步天下呢?
首先,它可以选择样品的最大吸收波长作为检测波长,这样可以大大提高灵敏度,对于紫外吸收强的组分,它的最小检测量可以达到10-12g。
其次,由于光路设计合理,紫外检测器的线性范围很宽,大多数紫外检测器可以在1.5-2.0AU吸收下保持较好的线性。
而且温度对化合物的紫外吸收波长及强度影响很小,所以检测器的温度效应小。
另外,当选择的样品检测波长下,流动相没有吸收时,流动相是基本无响应的,所以梯度洗脱对检测器的灵敏度影响也会较小。
除此之外,紫外可见光检测器属于非破坏型检测器,所以它可以与制备色谱或其他检测器联用。
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