东曹（上海）生物科技有限公司
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最新进展︱FcγRIIIa亲和色谱技术一步筛选抗体表达细胞系
单克隆抗体药物的质量控制具有挑战性很大程度在于翻译后修饰的多样性。其中IgG-Fc结构域的糖链异质性因其对单克隆抗体与免疫细胞表面受体蛋白FcγRIIIa的亲和力有重要的影响，而被认为是重要关键质量属性，并进行严格控制。IgG-Fc结构域的糖型依赖于所使用的细胞、培养基成分和温度等条件。
近日在学术期刊Biotechnology Progress (生物技术进展) 上发表的文章“Highly sensitive HPLC analysis and biophysical characterization of N-glycans of IgG-Fc domain in comparison between CHO and 293 cells using FcγRIIIa ligand”中，使用了TSKgel FcR-IIIA-NPR色谱柱，对采用Expi293和ExpiCHO细胞表达系统制备得到的利妥昔单抗和曲妥珠单抗进行了分析。
结果表明：不同细胞表达系统获得的单克隆抗体的色谱保留存在显著性差异，TSKgel FcR-IIIA-NPR色谱柱可用于快速、特异性抗体糖基化分析，比较表达抗体色谱保留差异，筛选抗体表达细胞系。
抗体样品表达和纯化
采用Expi293和ExpiCHO细胞表达系统制备利妥昔单抗和曲妥珠单抗。
分析条件
色谱柱: TSKgel FcR-IIIA-NPR (5 μm,4.6 mmI.D.×7.5 cm)
流动相A: 20 mM乙酸钠, 50 mM NaCl (pH5.0)
流动相B: 10 mM甘氨酸盐酸盐 (pH3.0)
线性梯度: (0-100%B), 28分钟; 100%流动相B, 10分钟
流速: 0.6 mL/min
检测器参数: UV@230 nm
样品浓度: 14 μm
进样量: 10 μL
结果与讨论
▼ Expi293和ExpiCHO细胞表达利妥昔单抗和曲妥珠单抗分离色谱图
▼ Expi293和ExpiCHO细胞表达利妥昔单抗和曲妥珠单抗糖型分析结果
如上面色谱图所示：不同细胞表达系统获得的单克隆抗体的色谱保留存在显著性差异，Expi293细胞表达系统制备利妥昔单抗和曲妥珠单抗在色谱柱上保留强组分所占比例相对较高。
进一步糖型分析实验结果表明：Expi293细胞表达系统制备抗体中IgG-Fc结构域聚糖末端含有半乳糖残基的糖型所占比例明显较高(见表)。TSKgel FcR-IIIA-NPR色谱柱可用于快速、特异性抗体糖基化分析，比较表达抗体色谱保留差异，筛选抗体表达细胞系。
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