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东曹（上海）生物科技有限公司
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使用UHPLC-SEC色谱柱优化尿激酶分析方法

东曹分离与纯化
2020.9.25

尿激酶是从新鲜人尿中提取的，或从人肾组织培养中获得的一种酶蛋白，是临床上一种常用的溶解血栓的药物。它由高分子量尿激酶 (Mw=54000) 和低分子量尿激酶 (Mw=33000) 组成的混合物。

为使尿激酶达到最佳分离效果，本应用使用粒径2 µm的TSKgel UP-SW2000超高效液相尺寸排阻色谱柱与G2000SWXL色谱柱，对尿激酶进行了对比分析。


溶液的配制

色谱流动相配制：0.2 mol/L磷酸二氢钠水溶液，用磷酸调pH至3.0 。

样品：尿激酶测试方法优化溶液浓度：2.5 mg/mL


分析条件

仪器：Thermo Ultimate3000

色谱柱1：TSKgel UP-SW2000 (2µm, 4.6 mmI.D.×30cm)

色谱柱2：TSKgel G2000SWXL (5µm, 7.8 mmI.D.×30cm)

流速：0.18 mL/min for UP-SW2000、0.5 mL/min for G2000SWXL

柱温：25℃

样品盘温度：10℃

进样量：10 µL

检测器：紫外检测器@280nm


 分析结果

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图1.  UP-SW2000色谱柱分离谱图

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图2.  G2000SWXL色谱柱分离谱图

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结果与讨论：

相较于G2000SWXL色谱柱，TSKgel UP-SW2000对多聚体、高分子量尿激酶、低分子量尿激酶的分离度均有所提高。

同时对比了等量溶质不同进样体积，高浓度样品小进样量，分离度较好一些。UP-SW2000色谱柱可满足药典要求：高分子量尿激酶峰面积占90%以上，且与低分子量尿激酶分离度大于1.0。


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