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液相色谱柱新柱活化、使用后冲洗及其他日常维护操作注意事项

通微

2020.8.13

新柱启用前注意事项

新购色谱柱使用之前：仔细阅读色谱柱使用说明，了解色谱柱的基本信息，如pH耐受范围、操作温度耐受范围、操作压力耐受范围、保存溶剂等信息，对该色谱柱的适用范围有个大概了解，以免后期使用不当导致损坏。

新购色谱柱柱效测试：可按照色谱柱出厂报告方法进行柱效测试，也可按照国标方法（如JJG705-2014）进行柱效测试，测试结果存档，以便为后期色谱柱的性能评价做参考。

新柱活化

新购色谱柱在使用之前，有必要进行活化操作，以便延长色谱柱的使用寿命，不同类型的色谱柱有不同的活化方法，下面就一些常规的液相色谱柱进行活化方法的介绍：

常规反相色谱柱：如最常用的C18柱，先用甲醇或乙腈冲洗20-30倍的柱体积，然后再用流动相平衡10-30倍柱体积。（若使用含盐流动相，则需要使用含原有比例但不含盐的流动相进行中间过渡，以防色谱柱堵塞）

正相色谱柱正相模式：采用正相色谱柱做正相色谱时，直接用流动相平衡20-30倍柱体积。

正相色谱柱反相模式：如一些氨基柱、氰基柱，一般都是保存在正相流动相中，用于反相色谱分离模式时，需要先用过渡试剂进行过渡（因为正相溶剂和反相溶剂一般是不互溶的），如用异丙醇冲洗色谱柱50-100个柱体积（过渡时需注意：异丙醇黏度大，为防止柱压过高导致色谱柱损坏，需用低流速进行过渡）。

日常使用及使用后冲洗

为防止堵塞，样品及流动相均需过滤后再使用，必要的话可配合在线过滤器或保护柱使用。

色谱柱用后及时冲洗：

1）反相色谱柱：如C18柱，先用高比例水相冲洗20-30倍柱体积，然后可梯度降低水相比例、提高有机相比例（如甲醇或乙腈/水=50/50）冲洗20-30倍柱体积，最后保存在纯有机相中（如甲醇或乙腈中。（注意：若使用了含盐流动相，则需适当延长冲洗时间，以便将色谱柱内残留的含盐流动相冲洗干净）

2）正相色谱柱正相模式：正相色谱柱的耐压限度一般较低，所以无论在使用时还是清洗时都要低流速起步。因不同正相柱保存溶剂可能稍有差异，所以其用后清洗和保存方法还需严格按照使用说明书来操作。

3）正相色谱柱反相模式：如一些氨基柱、氰基柱，因高比例水相会加速氨基柱键合官能团的水解，所以一般不会用高比例水相进行氨基柱的冲洗，用后可直接用一定比例的有机相/水进行冲洗。冲洗后对于短时间保存可直接保存在反相有机相如乙腈中，若要长期保存，则需用异丙醇低流速过渡后保存在正己烷中。

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