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解决方案|高效液相色谱法检测“春天里的野蒜”-薤白中腺苷含量

东西分析
2022.5.06
前言

春天是野菜生长的季节,这个季节的野菜口味独特,营养丰富。在视频上,我们经常可以看到的一幕:春天里,倚靠着山丘的村民们,提着篮子,走进山里,去寻找野菜的美味。小根蒜就是这个季节里最有味道的野菜,它可以用来做成汤、菜、糕点等。其实,小根蒜,学名薤白,别名野蒜、薤根、大头菜子、小独蒜、小蒜等,自古以来,薤白就是药食两用之佳品。作为药品,薤白归心,肺、胃、大肠经,可用于胸痹心痛,腕腹痞满胀痛,泻痢后重等。目前研究表明薤白中含有大量的挥发油、腺苷、色氨酸及其衍生物和甾体皂苷等成分。近年来的研究表明,腺苷具有舒张血管、降低血压、减慢心律、抑制血小板聚集、松弛血管平滑肌等生理活性;还具有触发或介导缺血预适应、减轻再灌注损伤等心脏保护效应;在美国,腺苷是经FDA批准的转复阵发性室上性心动过速(PSVT)的一线药物。它是薤白治疗胸痹等症的主要活性成分之一。本文采用反相高效液相色谱法对薤白中腺苷的含量测定进行了研究,本法具有准确、快速、易行等优点,可作为测定薤白中腺苷含量的常规检测。

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LC-5520液相色谱仪



PART ONE
实验部分




仪器设备与试剂


LC-5520 液相色谱仪(紫外检测器);
AS-405 自动进样器
DM-101 在线脱气机;

磷酸二氢钾 (分析纯)

无水乙醇(优级纯)

甲醇 (色谱纯)

腺苷标准品。

实验条件


色谱柱:C18 4.6nm*250nm
流动相磷酸二氢钾(0.01mol/L+甲醇=1585
  速:1.0 mL/min 
检测波长:254nm
进样量:20 μL


样品处理


取一定试样进行粉碎混匀后,准确称取1g左右(精确至0.001g)试样,加入约20mL提取液,超声提取30min,取出后用提取液定容至刻度,混匀后取一定量过滤膜备用。



PART TWO
实验结果



标准曲线

将腺苷的标准曲线溶液,进行HPLC分析,以峰面积为纵坐标,以浓度为横坐标绘制标准曲线,如图1、图2所示。


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 腺苷标样色谱图


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2腺苷校准曲线


由图2可以看到,校准曲线回归方程为:Y20671.49X+0.00;相关系数为:0.99985。腺苷在0.4µg/mL-60µg/mL的范围内,有良好线性关系。

提取液的选择

在同样的色谱条件下,分别用乙醇-水和甲醇-水作提取液进行比较,如图34所示。

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3 用乙醇-水作提取液的色谱图


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4 用甲醇-水作提取液的色谱图


由图3和图4可以看出,用提取液乙醇-水提取的腺苷比用提取液甲醇-水提取的腺苷含量低2/3左右,所以腺苷适合于用甲醇-水作提取液。



PART THREE
实验总结



本文建立了利用高效液相色谱测定薤白中腺苷含量的方法:色谱柱:XBP-C18柱;流动相:磷酸二氢钾(0.01mol/L+甲醇=1585;流速1.0 mLmin;进样量:20 µL;紫外检测器,波长 254 nm。柱温:室温。方法在0.4 μg/mL-60.0μg/mL之间线性良好,线性相关系数r≥0.999。实验证明该方法精密度和准确度好,样品处理简单,适用于常规质量检测。



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