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液相色谱方法开发中紫外吸收波长的选择
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（图片来源：包图网）
液相色谱方法开发过程中，样品的紫外吸收波长对开发结果具有举足轻重的影响。对于许多样品而言，只有仔细选择合适的检测波长，才能得到良好的分离效果。选择波长时需了解各样品组分的UV光谱，若能取得被测物的标准品，可较快获得各样品组分的UV图谱，应用DAD还可获得大量的其他补充信息。
选择吸收波长一般包含（不限于）
以下几种考虑
1、不光考虑目标物的最大吸收波长，同时要考虑样品干扰物吸收值最小的波长。
2、饱和烃类以及其氨基或氰基衍生物是仅有的一类完全不适合UV检测的有机化合物。
3、被特定基团（-O-、-OH、-Cl、-COOH、-COOR）取代的饱和烃类具有临界吸收值，可能需在短波长处（185-210nm）检测。
4、除上述几类化合物外，一般化合物都能在较长波长（>210nm）检测。下表列出各种官能团的最大波长与摩尔吸收系数。
一些常用官能团的最大吸收波长与摩尔吸收系数
5、流动相组分的紫外本底吸收。此项考虑涉及到溶剂的种类选择、流动相pH选择以及流动相缓冲盐选择等。有些酸有紫外本底，如甲酸，乙酸；有些没有，如磷酸。这样，在使用较低波长检测的方法时，就要考虑使用紫外本底小的酸。冰醋酸在短波长检测下应该慎用。水在180nm以上实际无吸收，可忽略其影响。正相色谱所用溶剂的吸收度通常更强，所以一般需在长波长检测。
反相流动相组分的UV吸收值与波长的关系
正相溶剂的UV吸收值与波长的关系
6、最大吸收波长λmax与化学结构的关系。紫外光谱提供了分子中生色团和助色团的信息，目前虽不能精确计算紫外特征吸收峰，但已总结出各种经验规则。最早提出的Woodward（伍德沃德）和Fieser（费塞尔）规则可用来估算二烯烃，多烯烃及共轭烯酮类化合物的最大紫外吸收波长。
多烯烃类与α，β－不饱和酮类紫外吸收的经验规则
母体 | C=C-C=C(在己烷中) (1）无环二烯烯烃或 异环二烯经217nm (2）同环二烯烃253nm | C=C-C=C215nm (在乙醇中) |
环内双键加 | 36 | 39 |
环外双键加 | 5 | 5 |
延伸双键加 | 30 | 30 |
共轭体系上 取代烷基加 | 5 | α，10；β，12；γ，δ，18 |
助色团 RCOO加 | 0 | α，β，γ，δ，6 |
RO加 | 6 | （OCH3）α，35；β，30； γ，17；δ，31 |
RS加 | 30 | β，85 |
Cl加 | 5 | α，15；β，12 |
Br加 | 5 | α，25；β，30 |
NR2加 | 60 | β，95 |
参考资料：
1. 实用高效液相色谱法的建立［美］L.R.森德尔 J.J.柯克兰 J.L.格莱吉克 著．张玉奎 王杰 张维冰 译．
2. 基础有机化学（第三版）．刑其毅 裴伟伟 徐瑞秋 裴坚．
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