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如何选择缓冲盐？
缓冲盐在液相中也是不可忽视的重要环节，在反相色谱分析中，流动相的PH值一般在2.5－7之间，当分析物在反相条件下可离解，或样品的PH值在2.5－7之外时，就需要缓冲液，在反相条件下可离解的化合物一般有氨基和羧基，他们的Pka在1－11之间，选择正确的缓冲液PH值可保证可离解的官能团处于一种形式，离子形式或中性化合物的形式，如果样品的PH值对柱子有伤害，则缓冲溶液可使其变温和或减小其危害。
1、缓冲盐的浓度
缓冲盐的浓度对离子样品保留值的影响通常较小，浓度一般为10-50mmol/l。
2、缓冲盐的类型
缓冲盐类型的选择，主要取决于所需要的缓冲能力，在反向色谱中，流动相中水相的pH和离子强度在开发对条件微小变化不敏感的耐用方法中非常重要。对于离子型化合物，典型的样品的保留随pH改变而明显变化。
通常在pH2到4条件下，保留时间对pH的微小改变稳定性最高。因此建议将这一pH范围作为大多数样品方法开发的起始pH，包括碱性化合物和一般的弱酸。缓冲盐溶液的pH值越接近其pka，缓冲能力越强。一般缓冲盐溶液的pH值应在其pka±1的范围内.
3、缓冲盐的离子缔合
如酸性条件下分离碱性化合物，加入NH4CL，碱性物质离子与反离子相互作用的平衡导致它们相互的溶剂化并形成相关复合物离子：[碱]+[Cl]?=[碱+--Cl?]，在低pH时，碱性化合物被完成质子化，溶液阴离子（如CL-）在流动相中破坏了碱性物周围的水分子并增加其疏水性，导致样品保留时间增加，当盐浓度大于50mM时，保留时间略有下降[4]，这可能是饱和反离子CI-引起的离子相互作用的屏蔽作用。此外还可以添加硫酸钠或者高氯酸钠等改变碱性化合物的保留。
4、缓冲盐的其它性质
缓冲盐的溶解性、挥发性和稳定性（可能与设备、样品和或色谱柱发生作用）对某些分离也很重要。如磷酸盐，在含有高浓度有机相（70%以上），可能会析出；一些缓冲剂放置即降解，贮存或长期使用后其紫外吸收会增加（如：TFA、三乙胺）；一些缓冲盐能通过形成离子对，对样品发生作用（如三氟醋酸缓冲剂与阳离子样品，三乙胺与阴离子样品等）；挥发性的缓冲盐如碳酸胺、甲酸铵、醋酸铵等可应用于蒸发光散射、质谱的检测。
5.举例说明：
例如苯甲酸，苯甲酸的Pka等于4.2，理论上讲当PH值等于2.2时，99％的苯甲酸以中性化合物存在，PH值等于6.2时99%的苯甲酸以离子形式存在，所以当缓冲液PH值等于2.2时，中性化合物以羧酸形式保留于反相柱，磷酸和柠檬酸缓冲液能用于PH等于2.2。
当化合物只有氨基时，缓冲体系的选择十分简单，大多数化合物在PH值小于9时都被质子化，所以所有PH值在7或更低时均适合应用，你也许会问水的PH值大约是7，为什么还用缓冲盐，因为缓冲液有助于增加方法的可靠性，以及的尖锐性，PH值降低有助于氨基化合物保留时间减小，减小化合物与硅胶表面硅羟基的作用，而使峰更尖锐，磷酸钾盐适合用于氨基化合物。
在一般情况下，他是含羧基，氨基化合物分析中最好的缓冲液，并且我们认为在氨基分析中钾盐比钠盐更好。
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