致备将始终确保为客户提供的细胞具有真实性、正确性,无交叉污染, 客户因购买细胞而产生的质量和真假的后顾之忧,以 的诚意提供信息 的细胞产品。并提供专业的细胞鉴定服务(采用ATCC细胞鉴定金标准--STR基因分型技术),并建立完善鉴定,种类齐全的细胞资源库,能为广大科研工作者在发表高质量文章时提供可靠的“细胞鉴定依据”。
实验原理Western Blot是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过聚饼烯酰胺凝胶电泳分离细胞或者组织样本中的蛋白,经转膜、封闭后目标蛋白与特有性一抗结合,再与辣根过氧化物酶(HRP)标记的第二抗体起反应,经过底物显色,分析曝光条带的位置和灰度分析获知目标蛋白在样本中的表达情况(见图4.4)。该法结合了凝胶电泳和固相免疫测定两种技术的高特异性和高敏感性,可以对目标蛋白进行定型和半定量的分析。 Western Blot实验原理示意图
技术应用通过抗原抗体反应对目标蛋白的表达进行半定量检测,还可用于蛋白-蛋白、蛋白-DNA和蛋白-RNA相互作用的后续分析。WB作为一种方便可靠的研究工具,将与谱和蛋白质芯片等技术一起在蛋白质组时代发挥重要作用。实验流程实验结果展示 目标蛋白过表达上调的WB结果 目标蛋白经RNAi下调的WB结果操作建议:收到细胞后,请用75%酒精对细胞培养瓶外表进行消毒,并将细胞置于培养箱中稳定至少1h以上,待细胞形态正常,方可进行后续操作及细胞实验。(开封前如有污染及质疑形态请及时反馈)
1.若细胞密度未超过85%,且瓶上无特殊标注,则可以收集过滤多余的培养液,视实际情况留6-8ml培养液培养过夜后处理。
2.细胞密度超过75%即可以进行传代。同样收集过滤多余的培养液,用PBS洗涤1-2次,加入1ml胰酶消化液,室温下消化,对光观察,轻拍甁壁若细胞能呈流沙状脱落,则立即用胰酶用量2倍以上的含10%血清的完全培养液终止消化,可轻轻吹打几次细胞,尽量使其变成单细胞悬液,将细胞收集于离心管中1000r离心5min即可,弃去上清,轻弹管底,将细胞弹散,加入2-3ml左右新鲜培养液重悬细胞,按所需比例进行传代。
冻存条件: 70%基础培养液+20%胎牛血清+10%DMSO(可以使用成品冻存液)
保存条件: -80℃冰箱建议不超过6个月;长期保存请使用液氮
注意事项: 1. 如收到的细胞没有相关培养经验,建议 次消化时在显微镜下实时观察消化情况,掌握细胞的 消化时间,若3分钟内无法脱落的细胞,可以在37℃条件下提高胰酶活性,适当延长时间,从加入胰酶到终止消化的过程,所有操作都要迅速;
2. 建议收到细胞后的 次传代比例为1/2 多不要超过1/3;
3. 若细胞拉丝、黏连则说明消化过度,建议适当缩短消化时间,若发现仅有一半细胞先脱落,则可以优先终止,剩下的继续消化。
售后咨询: 1.培养瓶出现破裂或漏液现象,请立即拍照并及时与我们联系;
2.开封前发现污染或质疑形态,请立即拍照并及时与我们联系;
3.发现较多细胞脱落,请先放培养箱静置1-2h再观察,若细胞能够贴回,请及时传代重铺,若不能请立即拍照并与我们联系;
4.如有任何疑问,均可与我们技术人员进行反馈。
上海致备生物科技有限公司,由中科院、上海交大,复旦大学等一批 的博士组成的博士技术团队;公司定位于为客户个性化定制解决具有一定技术难度的、公司技术团队自身擅长的技术服务及基础生物医学科研CRO服务;目前公司专注于2大优势实验方向,一方面是公司技术团队自身擅长的优势技术服务包括纳米材料的定制和表征分析检测,RNApulldown,RIP,CHIRP,Chip-seq,构建悬浮细胞稳转株,原代细胞永生化,耐药株,Western blot等;另一方面是常规的基础生物医学科研CRO服务,公司500多平实验室包括各种试剂盒检测平台,核酸水平的研究平台,蛋白水平的研究平台,细胞水平的研究平台,蛋白组学的实验平台,疾病动物模型的研究平台,整体实验设计服务平台等;