1) 全蛋白的提取:将细胞用PBS洗涤2遍,每瓶加入RIPA裂解液400ul,用细胞刮迅速将细胞刮下转移到EP管中(剪取约20mg组织于EP管中,加入1ml RIPA裂解液,组织均浆机将组织打碎),将EP管置于冰上裂解30min,12000rpm离心10min,取上清液备用。
2)蛋白定量:将0.5mg/ml的标准品按0、1、2、4、8、12、16、20ul入96孔板中,加水将溶液补足到20ul;取2ul蛋白样品于96孔板中,加水补足到20ul;每孔中加入200ul的BCA工作液,37℃水浴30min,酶标仪上测定A570。
3)向蛋白样品中加入四分之一体积的5x上样缓冲液,煮沸10min。
4)电泳:上层为5%的浓缩胶;下层为12%的分离胶;根据样品蛋白含量调整上样体积,使每泳道的总蛋白量相同。
5)湿式转膜:200mA,2h。
6) 封闭:5%的脱脂奶粉4℃摇动,封闭2h。
7)一抗孵育:1:1000稀释,4℃孵育过夜。
8)二抗的孵育:0.1%的TBST洗膜3次,每次10min,1:1000稀释,室温孵育2h。
9)ECL曝光:0.1%的TBST洗膜3次,每次10min,滴加发光液,压片,冲洗胶片。
Western Blot技术价格
Western Blot技术信息由南京云桥璞瑞生物科技有限公司为您提供,如您想了解更多关于Western Blot技术报价、型号、参数等信息,欢迎来电或留言咨询。