染色质免疫共沉淀(Ch-IP)

一、技术原理

在生理状态下把细胞内的DNA与蛋白质交联在一起，通过超声或酶处理将染色质切为

小片段后，利用抗原抗体的特异性识别反应，将与目的蛋白相结合的DNA片段沉淀下来，

以富集存在组蛋白修饰或者转录调控的DNA片段，再通过多种下游检测技术（定量PCR、

基因芯片、测序等）来检测此富集片段的DNA序列。

二、实验步骤

1.样品准备与交联

细胞收集后，用37%的formaldehyde处理细胞，交联核酸与DNA结合蛋白；加入甘氨

酸终止。

2.细胞超声波破碎染色质

用超声方法随机把染色质破碎成200-1000bp的DNA片段；片段分成两部分，一份用于

免疫共沉淀，一份用于对照实验（InputDNA）。

3.免疫沉淀反应

使用目的蛋白质的特异性抗体与超声破碎的DNA片段进行免疫沉淀，形成DNA－蛋白

质－抗体复合物，利用proteinA/G琼脂糖磁珠富集抗体复合物。通过抗原和抗体反应形成

DNA－蛋白质－抗体复合体，然后沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段

4.DNA－蛋白质－抗体复合物的解交联和DNA纯化

将富集的DNA－蛋白质－抗体复合体解交联释放DNA片段，并进行纯化；InputDNA的

片断作不进行IP实验，但需要去交联并纯化

5.PCR鉴定

比较ChIPDNA,InputDNA及对照DNA信号强度，进行普通PCR或者相对精确的荧光定

量PCR扩增。

三、服务流程

1.甲醛处理细胞

2.超声破碎染色质

3.加入proteinA，沉淀抗体-靶蛋白-DNA复合物

4.解交联

5.PCR分析

四、服务说明

1.客户提供

新鲜的样品材料（组织或细胞）；ChIP级别的抗体（或由我公司代购）；如ChIP结束

后进行检测，input作为对照；如结束后进行普通PCR或者荧光定量PCR，则需要提供预测

靶基因结合位点的具体序列或目标靶基因的名称、种属、序列或GeneBankAcession）

2.公司提供

1）检测图；

2）完整的实验报告，包括对每个步骤的详细说明（具体操作方法、试剂或溶液浓度等），

以及相应的结果及分析。

3.实验周期

3-4周。

4.价格

9000元/次（含试剂盒）抗体由客户提供

五、质量承诺

提供清晰的图片、可靠的数据和分析结果。

染色质免疫共沉淀价格

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