免疫组化
应用免疫学基本原理，通过标记的特异性抗体（或抗原）对组织内抗原（或抗体）的分别进行组织和细胞原位检测，从而进行定位、定性及相对定量的研究。
实验意义
1. 免疫组织化学可应用于恶性肿瘤的病理诊断和科研工作。
2. 可与组织化学染色方法的形态学诊断相结合，提高疑难肿瘤的鉴别诊断的准确率，并为肿瘤进行进一步的病理分型。
3. 指导和提供临床治疗方案的选择。
实验步骤
1. 石蜡切片免疫组化：
①67℃烘箱烘片2小时，常规脱蜡至水，用pH 7.4的PBS冲洗三次，每次3 min；
②将切片置于沸腾的柠檬酸盐缓冲液中中档微波处理10 min，蒸馏水冲洗三次，PBS冲洗三次，每次3 min；
③3%H2O2室温孵育10 min阻断内源性过氧化物酶的活性，PBS冲洗三次，每次3 min；
④5~10%正常山羊血清（PBS稀释）封闭，室温孵育10 min，吸去血清后滴加稀释至适当比例的一抗，37℃孵育1-2 h或者4℃孵育过夜；
⑤PBS冲洗三次，每次3 min；⑤滴加稀释至适当比例的带标记二抗，37℃孵育10~30 min，PBS冲洗三次，每次3 min；
⑥滴加适当比例稀释的辣根酶标记物工作液，37℃孵育10~30 min，PBS冲洗三次，每次3 min；
⑦显色剂显色，自来水充分冲洗，复染细胞核，酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封固。
2. 冰冻切片免疫组化：
①新鲜组织立即在恒冷冰冻切片机内切片，厚度为5~6 μm；
②载玻片可不打底，裱片后立刻用电吹风吹干；
③染色前需用冷丙.酮4℃固定10~20 min；
④PBS洗2次，每次5 min；
⑤3%H2O2灭活内源性过氧化物酶20 min，需避光处理；
⑥后续血清封闭与抗体孵育步骤与石蜡切片相似，最后脱水透明封片进行观察。
结果展示
1. 石蜡切片免疫组化[1]
2. 冰冻切片免疫组化[2]
实验完成周期及交付标准
1. 实验周期：1-2周
2. 交付标准：蜡块、切片、染色图片、灰度值分析、柱状图、实验报告（实验步骤、试剂、仪器等）
需确认的信息
1. 样本的种属？
2. 样本类型（固定的组织or蜡块or切片）
3. 检测的目的蛋白
4. 是否提供一抗，公司可代购
5. 阳性率或者半定量分析要求
6. 拍照要求
文献参考
[1] Jensen K , Rikke KrusenstjernaHafstr?m, Lohse J , et al. A novel quantitative immunohistochemistry method for precise protein measurements directly in formalin-fixed, paraffin-embedded specimens: analytical performance measuring HER2[J]. Modern Pathology An Official Journal of the United States & Canadian Academy of Pathology Inc, 2016, 30(2):180.
[2] Shi, ShanRong, Liu, et al. Evaluation of the Value of Frozen Tissue Section Used as "Golden Standard" for Immunohistochemistry[J]. American Journal of Clinical Pathology, 2008, 129(3):358.
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