核蛋白酵母双杂交文库构建服务-价格-分析测试百科网服务谱

型号	品牌	PIPES指数
病毒载体构建包装转染服务	易科攀搏生物	5.0
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相关信息

描述

现进行优惠促销，欢迎来电洽谈。免费赠送3个读码框处理，以确保蛋白可以正常表达。
可以选择增加提供转化到酵母的文库，可以提供足够100次筛选的酵母转化菌液文库，同时还会提供质粒文库。
可选均一化处理，可以有效提高低丰度基因筛选检出率。（样本内天然存在的基因，表达丰度差异是很大的，可以相差上千倍以上，任何文库构建方法也是需要做均一化处理的，不像有的公司由于不能做均一化处理，而宣传不需要做均一化）。
服务时间：25个工作日内

服务报价：

文库构建（不同技术方法）	报价
Clonetech-SMART技术方法	2.0万元
Invitrogen-Gateway技术方法	2.5万元
All-Direct技术方法	2.8万元

“自1989年Field等人建立了第一个基于酵母的细胞内检测蛋白相互作用的系统以来,酵母双杂交系统已经越来越多的应用于鉴定新的蛋白与蛋白相互作用,鉴定蛋白级联底物以及鉴定突变对蛋白与蛋白结合的影响等。有文献统计,目前已知的蛋白质相互作用至少有一半是通过酵母双杂交实验发现的！” 而文库筛选结果直接由文库质量的好坏所决定，构建出高质量的文库是得到好的筛选结果的关键因素。
我们拥有多年的文库构建经验，已完成数千个各类文库构建，所采用的技术以及试剂盒均为市场上高质量的文库构建试剂，保证所构建的每一个文库各项指标均为市场上高标准，我们构建文库的成功率为98%以上。
宝吉生物（海科生物）结合多年的文库构建经验，强势推出“All-Direct”文库构建技术，我们的产品较其他构建方法（主要有takara的SAMRT方法和invitrogen的gateway方法），技术和质量上都具有极大的优势。

一、产品质量标准与报价:：:
关于我们的文库构建产品，我们承诺的指标如下:
原始文库库容量大于1*10^7CFU；
平均插入片段大于1200bp ；
克隆阳性率大于95%。

二、技术特点与技术优势:

1.我们是采用同源重组的方法构建文库，没有经过任何的内切酶切割和连接过程，确保不会出现基因被酶切切断的情况，能够保证基因的完整性，而Clonetech的是用酶切连接的方式构建的。
2.由于我们采用的是重组的方式把cDNA重组到载体上，相对clonetech的SMART的T4连接酶的方法效率要高的多，我们承诺原始库的库容量在1*10^7以上。而且重组的方式假阳性很低，我们这里有的客户一次测3万个克隆，都没有出现一个空载的情况，我们承诺阳性率大于98%，这是酶切连接的方法远远无法比拟的。
3.Clonetech的SMART方法是用PCR的方法合成第二链的，由于PCR的选择性抑制及竞争性扩增，这样就会造成基因冗余度非常高，低丰度的基因PCR扩增不到，会丢失掉，长片段的基因也会丢失掉，另外会造成重复序列非常多，特别是起始的RNA样本量少的情况（比如5ug RNA以下就需要进行15个循环以上的PCR扩增，大大降低文库质量),，大大降低文库包含的基因数量，而我们的cDNA合成方法是用多种酶在16度恒温的条件下直接合成第二链的，这样就忠于样本自身的基因情况，不会人为的改变样本内的基因情况以及基因大小，大大提到文库的质量。
4.我们是采用的一种高质量的反转录酶，较clonetech的反转录酶具有反转录温度高（55摄氏度反转，clonetech的反转录酶是使用42度反转，较高的温度可以打开RNA的二级结构，可以获得更长的cDNA），反转录效率和cDNA长度要好的多。我们承诺文库的平均插入片段在1.3Kbp以上，最低长度也在1Kbp以上，而clonetech的SMART方法构建出来的文库一般只有几百BP。
文库构建流程:
1.RNA提取
2.mRNA提取
3.cDNA的酶促法合成
4.cDNA连接接头
5.cDNA按长度分离
6.cDNA与酵母双杂交文库载体(pGADT7或者pDEST22)进行all-direct重组
7.重组产物电转化
8.文库检测以及质粒提取

三、技术详细比较:

1．与Clonetech(Takara)的SAMRT方法技术比较：

步骤	SAMRT方法	我们的All-Direct方法	我们的优势
RNA提取	使用2ug的RNA	使用200ug以上的RNA	较多的起始RNA，大大提高基因的覆盖度，避免基因的丢失。
mRNA分离	不做mRNA分离	使用高质量的试剂盒基因mRNA的分离	进行mRNA的分离，去除RNA内核糖体以及残留的基因组对反转录的影响，以及避免文库内掺入核糖体等不需要的基因。
cDNA合成	PCR扩增的方法	酶促法直接合成cDNA	混合基因的PCR扩增，由于PCR具有偏好性，短片段和高丰度的容易扩增，低丰度的和GC含量高的不易扩增，会造成低丰度的基因丢失以及长片段的基因丢失。我们使用酶促法直接合成cDNA，不会有选择偏好性，保证每一个RNA分子都直接反转录成双链cDNA分子，即一开始有多少摩尔数的RNA，就会形成等量摩尔的cDNA。
基因与载体的连接	酶切连接	高效率的体外同源重组酶进行重组	SMART方法使用酶切连接或者酵母细胞内的低效率重组的方式，进行片段与载体的连接，效率低下，假阳性率高，原始文库的库容在110^5CFU-110^6CFU.我们使用高效率的体外重组方式，大大提高重组效率,文库的原始库容大于1*10^7CFU.
酵母文库的交付	转化到酵母细胞的文库菌	文库混合质粒或者转化到酵母细胞的文库菌	我们的产品可以自由选择是交付文库质粒或者转化到酵母细胞的文库菌，由于酵母菌不易长期保存，一般保存超过半年，文库的质量就大大降低，建议以文库质粒的方式长期保存，保存时间可以达10年以上。
文库的用途	酵母双杂交，酵母单杂交	酵母双杂交，酵母单杂交，膜蛋白酵母双杂交，酵母三杂交，细菌双杂交，原核表达文库，真核表达文库，慢病毒包装文库…	SMART方法由于其技术原因，只能构建酵母双杂交和酵母单杂交文库，而我们的系统可以构建出任何用途的文库，只要有可用的载体系统即可。
文库的多用途	无	有	我们的文库产品，可以方便的将文库再通过简单的方式转移到其他任意载体上形成其他用途的文库，而不需要重新构建文库，大大提高文库的使用范围和降低文库构建的成本。
文库的使用次数	30-80次	至少500次以上	SMART方法交付的是转化到酵母细胞的文库，且总量一般就50-100ml，只够最多做几十次的筛选，且用完就没有了，不可以复制。我们交付的产品，包括了高库容的大肠杆菌菌液和文库质粒，如果全部使用完，至少可以够做500次以上的筛选，且可以简单复制，理论上是不可能用完的，大大提高经济性。
文库产品指标	平均插入片段：600-800bp；库容量：1-5*10^5CFU；空载率小于10%	平均插入片段大于1200bp；库容量大于1*10^7CFU；空载率小于5%	我们的方法在原始库容和平均插入片段上都比takara的SMART的方法高很多

2. 与invitrogen的构建方法比较：

步骤	invitrogen方法	我们的All-Direct方法	我们的优势
RNA提取	使用200ug以上的RNA	使用200ug以上的RNA	较多的起始RNA，大大提高基因的覆盖度，避免基因的丢失。
mRNA分离	使用高质量的试剂盒基因mRNA的分离	使用高质量的试剂盒基因mRNA的分离	进行mRNA的分离，去除RNA内核糖体以及残留的基因组对反转录的影响，以及避免文库内掺入核糖体等不需要的基因。
cDNA合成	酶促法直接合成cDNA	酶促法直接合成cDNA	使用酶促法直接合成cDNA，不会有选择偏好性，保证每一个RNA分子都直接反转录成双链cDNA分子，即一开始有多少摩尔数的RNA，就会形成等量摩尔的cDNA。
基因与载体的连接	gateway方法	all-direct方法	gatway方法与我们的all-direct方法都是基于高纯度的同源重组酶，二者都属于同源重组系统，在重组效率上没有差异，差异在于，gateway方法需要经过两步重组才能装到目的载体上，这是由其技术缺点决定的，我们的all-direct方法是一步直接重组到目的载体上。由于gateway方法需要多一次重组，就需要多一次的重组反应以及文库甘油菌的扩增和质粒提取，特别是文库扩增阶段，由于文库的扩增会存在类似于PCR扩增的竞争性抑制，会造成低丰度的基因和长片段的基因丢失，每多做一次扩增和质粒提取，文库的插入片段平均下降200bp左右。
文库质粒提取	液体培养	铺板扩增提取	invitrogen方法使用液体培养的方式进行文库的扩增和提取，由于摇菌过程中的竞争性抑制，会造成低丰度的基因和长片段的基因丢失，每多做一次扩增和质粒提取，文库的插入片段平均下降200bp左右。而我们使用铺板扩增的方式，确保每个克隆都是独立生长的状态，避免的基因间的竞争性抑制，大大降低基因丢失的情况。
文库产品指标	平均插入片段大于1000bp；库容量大于0.5*10^7CFU；空载率小于5%	平均插入片段大于1200bp；库容量大于1*10^7CFU；空载率小于5%	我们的方法在原始库容和平均插入片段上都比invitrogen的方法高很多。

四、交付结果：

我们的酵母双杂交文库可以自由选择使用pGADT7（Clonetech,推荐）或者pDEST22（invitrogen）载体,交付的产品如下：

产品名称	交付保准	包装形式	储存条件
酵母双杂交文库甘油菌	库容：大于1*10^7CFU 平均插入片段：大于1200bp 阳性率：大于95%	1.5ml螺旋管	-80℃
酵母双杂交文库质粒	大于500ug	1.5ml螺旋管	-80℃
文库构建报告	电子版	Word和PDF格式	常温
文库构建图片	电子版	JPG格式	常温
转化到酵母细胞的文库甘油菌（可选）	100ml 库容大于：1*10^8CFU/ml	离心管	-80℃

五、服务时间:

25个工作日内，如需转化酵母延长15个工作日。
备注1：该酵母文库可以选择增加均一化处理步骤，我们使用DSN法均一化方法，可以构建出高质量的均一化酵母杂交文库，可以大大减少后续酵母筛选的工作量和筛选效率等。

六、材料要求:

客户构建指定的酵母双杂交cDNA文库，由客户提供组织、细胞或总RNA给我们即可：
细胞样本：细胞数量大于1*10^7
动物样本：大于1g
植物样本：大于2g
总RNA：大于200ug

七、客户案例:

目前我们已经成功完成2000多个的文库构建，主要客户为中国科学院上海植物生理生态研究所、上海交通大学、浙江大学、浙江省农科院、山东省农科院等多家单位完成酵母双（单）杂交文库构建服务，物种包括人、小鼠、大鼠、水稻、拟南芥、牡丹、稻飞虱、苹果、油菜、小麦、贝壳、葡萄、真菌等。

八、文库筛选:

我们是国内极少数能同时提供文库构建和文库筛选的公司，对于酵母双杂交筛选服务，您只需要提供诱饵基因序列即可，我们会进行以下工作，筛选的报价为3万元整:

客服中心

核蛋白酵母双杂交文库构建服务(宝吉生物)

上海宝吉生物技术有限公司