T/NAASS 059-2023
牛呼吸道合胞体病毒病竞争性酶联免疫 吸附试验抗体检测技术规程

Technical specification for detection of competitive ELISA antibodies against bovine respiratory syncytial virus

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标准号

T/NAASS 059-2023

发布

2023年

发布单位

中国团体标准

当前最新

T/NAASS 059-2023

 

 

适用范围

3　术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 牛呼吸道合胞体病毒 Bovine respiratory syncytial virus, BRSV 牛呼吸道合胞体病毒是单股负链RNA病毒，属副粘病毒科、肺病毒属。感染奶牛和肉牛后可引起急性呼吸道疾病综合征。 3.2   竞争性酶联免疫吸附试验 Competitive enzyme linked immunosorbent assay, cELISA 竞争性ELISA法是将已知的特异性抗原包被在固相载体上，加入待测样本和酶结合物，其中的相应抗体即可与载体上的抗原和酶结合物竞争结合，洗去未结合的材料和被竞争结合的酶结合物，加入酶的底物，由呈色反应来测定抗体。 4　竞争性酶联免疫吸附试验 试验准备 实验环境、仪器与设备、洗液的制备、稀释液的制备、示踪剂工作液的配制按照试剂盒说明书规定执行。稀释用蒸馏水应符合GB/T 6682的要求。 检测样品 无菌采集牛静脉血2 mL～3 mL,自然凝固1 h～2 h，1500rpm/min~2000rpm/min离心5 min，收集血清于1.5 mL离心管中。 操作程序 使用前将所有试剂（结合物除外）恢复至室温（20 ℃～25 ℃），轻轻摇动或旋转，使试剂混合均匀。 4.3.1　取板 取出微孔板，并在操作记录表上标记样品的位置。如果使用微孔板的一部分，则只需取出足够检测样品的条数。未使用的微孔板条用锡箔纸包好，保持干燥与密封，2 ℃～8 ℃保存。 4.3.2　加样 按照试剂盒说明书规定浓度，稀释血清样品，每孔加入待检样品，按照板孔布局加阴性和阳性对照。 4.3.3　稀释酶结合物 用稀释液将酶结合物稀释至所需要的量。 4.3.4　加酶结合物 每孔加入酶结合物，摇匀。 4.3.5　感作 将微孔板密封后，37 oC孵育。 4.3.6　洗板 弃去微孔板中液体，用300 μL左右的洗涤液洗涤每个板孔6次。在每一次洗涤后，甩去每个板孔中的液体，在洗涤时以及在加入下一步试剂之前要防止反应板出现干燥现象，避免孔内产生气泡，在最后一次甩掉后，在吸水材料上用力扣板，吸去剩余的液体. 4.3.7　加底物 每孔加入底物溶液。避光室温孵育。 4.3.8　加终止液 每孔加入终止液终止反应。 4.3.9　测定吸光值（OD值） 酶标仪预热15 min，在加入终止液5 min内读取波长的吸光度值。 实验有效性检测 只有当满足试剂盒说明书规定的条件时检测才有效。 结果计算 使用试剂盒说明书指定的计算公式进行结果计算。 结果判定 使用试剂盒说明书规定的判定标准进行结果判定。

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