由于限制性内切酶识别序列的严格性,识别序列发生一个碱基的变化都使得酶切位点不能被酶切,从而保持原有序列长度(原理见下图)。Pst I酶的识别序列和酶切切口 RFLP法用于基因分型时,限制性内切酶的识别序列选择主要依据SNP位点上的已知等位基因,根据待测的SNP等位基因和位点附近序列,查找符合序列的限制性内切酶。设计引物扩增含有SNP位点的DNA片段。...
在扩增过程中,只有当引物3’末端的碱基与SNP位点的等位基因互补配对时,才能正常延伸扩增;而当引物3’末端的碱基与SNP位点的等位基因不互补配对时,则不发生扩增反应,由此对扩增产物进行凝胶电泳或荧光PCR检测,则可确定SNP基因型。 ...
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