AWWA WQTC55007
开发水样中隐孢子虫的定量实时 PCR 检测方法

Development of a Quantitative Real-Time PCR Assay for Cryptosporidium parvum in Water Samples

标准号

AWWA WQTC55007

发布

1970年

发布单位

SCC

当前最新

AWWA WQTC55007

 

 

适用范围

隐孢子虫引起的公共卫生问题促使供水行业开发非常精确的分析工具来评估水中这种寄生虫的存在。通常用于检测水中隐孢子虫卵囊的经典方法基于间接免疫荧光测定 (IFA)，这种方法耗时长，而且对影响人类的隐孢子虫种群不具特异性。为了克服这些局限性，开发了一种基于实时定量 PCR 的定量测试，使用 TaqMan 荧光检测系统 (TaqMan PCR)。TaqMan PCR 使用特定的荧光探针和两个引物识别了隐孢子虫基因组序列的 138 个碱基对部分。该系统使用高性能 DNA 聚合酶进行核酸扩增，并使用内部荧光 DNA 探针进行 5\' 核酸酶测定进行实时定量。荧光强度与隐孢子虫靶 DNA 序列的拷贝数成正比，并用自动荧光计检测。通过将 C. parvum 卵囊数量未知的样本获得的荧光信号与 C. parvum 卵囊标准稀释液获得的荧光信号进行比较，可以进行定量分析。这种实时定量 PCR 检测可以在 3 小时内对 6 个对数动态范围内的 C. parvum 卵囊进行可靠的定量分析。这种分子检测对水工业非常有用；它可用于饮用水质量控制以及处理效率评估和风险资源识别。包括 11 个参考文献和图表。

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