ul， ③λDNA酶切片段（已65℃10分钟灭活）10ul ④T4 DNA连接酶1ul 2．混匀后，放13℃水浴过夜，待电泳检测。...
TA克隆常见问题分析及其解决方案 问 题 可能的原因 建 议 转化后无 克隆菌产生 转化过程有问题或感受态细胞失活 可通过转化pUC18/19等未切割的可用于抗性筛选的质粒，检测感受态细胞的转化效率和转化操作是否正确 插入对照DNA片段的阳性率低 10×快速连接缓冲 液稀释不当 提供的T4 连接酶缓冲液为十倍浓度，10μl 反应体积加1μl T4 连接酶缓冲液 连接反应存在问题 连接缓冲液只有低的活性...
酶及缓冲液 T4 噬菌体 DNA 连接酶，多聚核苷酸激酶，限制性内切核酸酶。 3. 核酸和寡核苷酸 外源或目的 DNA 片段，人工合成的寡核苷酸或接头，用 TE ( pH 8.0) 溶解，终浓度约为 400 ug/ml。 4. 专用设备 层析设备，温度可调至 65℃ 的水浴装置。 二、方法 1....
T4 DNA 连接酶可将双链复合物缺刻连接，其中包括 RNA-DNA 杂合链及 RNA-RNA 杂合链。实验材料T4DNA 连接酶T4 多聚核酸激酶RNA 供体受体寡核苷酸 cDNA 模板试剂、试剂盒10X 连接缓冲液[Y32P]ATP无 RNase 水l0 mmol LATPRNasin。无 RNase 的 DNase。...
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