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进行冷冻时,我们首先会将配子或胚胎置于较低浓度的冷冻保护剂的平衡溶液中平衡,使渗透性冷冻保护剂能充分渗透进入细胞内,使细胞逐步脱水。然后再将胚胎置于较高浓度的冷冻保护剂的玻璃化溶液中,较短时间平衡后,再装入冷冻载体,投入液氮。与慢速冷冻技术不同,玻璃化冷冻技术采用微量体积高浓度的冷冻保护剂,进行极快速的降温。操作过程简单,且不需要昂贵的程序降温仪,成本低廉。...
玻璃化冷冻主要操作步骤简单,包括:高浓度的冷冻保护剂置换细胞内外的溶液,快速降温,使溶液黏稠度极度提高并固化,放置液氮保存。影响玻璃化冷冻效果的因素主要包括:①冷冻保护剂。同一种组织细胞,冷冻保护剂的浓度和种类是最重要的一个影响因素。...
进行冷冻时,我们首先会将配子或胚胎置于较低浓度的冷冻保护剂的平衡溶液中平衡,使渗透性冷冻保护剂能充分渗透进入细胞内,使细胞逐步脱水。然后再将胚胎置于较高浓度的冷冻保护剂的玻璃化溶液中,较短时间平衡后,再装入冷冻载体,投入液氮。与慢速冷冻技术不同,玻璃化冷冻技术采用微量体积高浓度的冷冻保护剂,进行极快速的降温。操作过程简单,且不需要昂贵的程序降温仪,成本低廉。...
(ⅱ) 合理选择毒性低的冷冻保护剂, 密切监测其温度、时间和溶液稀释浓度, 以及从细胞中逐步添加和脱除的情况。 玻璃化保护剂的最大优势是对细胞内的水分扰动极小, 为哺乳动物卵母细胞和胚胎玻璃化成功冻存的实现带来了新的希望。 (ⅲ) 由于卵母细胞或胚胎会与液氮的开放式容器直接接触, 导致污染的高风险性, 因此需要不断完善能够降低污染风险的安全操作方法。...
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