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弓形虫卵囊快速分子检测方法的建立

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适用范围: 弓形虫感染在全世界的动物和人类中广泛流行。在美国，估计有 23% 的青少年和成年人有感染弓形虫的实验室证据。弓形虫已被确定为免疫功能低下人群的主要机会性病原体，可导致危及生命的疾病。被家猫或其他猫科动物粪便污染的水可能是人类接触弓形虫卵囊的重要来源。由于缺乏有关地表水中弓形虫流行情况的信息，显然需要一种快速、灵敏的方法来检测水中的弓形虫。目前可用的动物模型和细胞培养方法耗时、昂贵且劳动密集，需要数天至数周才能获得结果。通过聚合酶链反应 (PCR) 检测弓形虫核酸已成为首选方法。我们开发了一种弓形虫卵囊核酸的 PCR 扩增和检测方法，该方法结合使用热启动扩增来减少非特异性引物退火，使用尿嘧啶-N-糖基化酶来防止因残留污染而导致的假阳性结果，使用内部标准对照来识别因样品抑制去除不充分而导致的假阴性结果，并使用非放射性 DNA 杂交免疫测定法进行 PCR 产物寡探针确认。该方法可以在不到一天的时间内提供阳性的确认结果。使用克隆的弓形虫 DNA，检测灵敏度小于 200 飞克。回收卵囊 DNA 后可以检测到不到 100 个卵囊。弓形虫卵囊 PCR 检测方法的开发将提供一种有用的技术来估计地表水中存在的弓形虫卵囊水平。包括 36 个参考文献和图片。

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