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收集胰蛋白酶消化的细胞并离心,用PBS清洗。2. 用100μl 裂解缓冲液冰浴溶解沉淀10min(每500000个细胞20μl裂解缓冲液)。3. 10000rpm,4°C离心10min,取上清转移至新管。4. 用考马斯亮蓝法检测蛋白质浓度。5. 用裂解缓冲液将溶液浓度调到5mg/ml,每小瓶中放100μl,-80°C储存。6. 按照1:1体积比混合2×样品缓冲液,煮沸5min后,室温放置5min。...
然后用细胞刮子沿着瓶壁开始刮细胞,如果所需要刮的同种细胞有多瓶,则将第一瓶刮下的细胞液吸出转入下一瓶中继续刮 (由于处理后的细胞裂解液较粘稠,所以宜用直径大点的吸液管吸取)。3、 吸出刮好的细胞裂解液置于14ml 离心管中 (置于冰上),然后重复步骤2以刮取剩下的细胞。...
裂解液的制备 A. 制备细胞裂解液: ①收集胰蛋白酶消化的细胞并离心,用PBS清洗。 ②用100μl RIPA缓冲液冰浴溶解沉淀10min(每500000个细胞20μl RIPA缓冲液)。 ③10000rpm,4℃离心10min,取上清转移至新管。 ④用考马斯亮蓝法检测蛋白质浓度。...
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