AWWA WQTC55150
检测水源或成品水中传染性肠道病毒的分子方法

Molecular Methods for the Detection of Infectious Enteroviruses in Source or Finished Waters

标准号

AWWA WQTC55150

发布

1970年

发布单位

SCC

当前最新

AWWA WQTC55150

 

 

适用范围

环境或水源水样，甚至成品饮用水样，可能含有可通过 PCR 和 RT-PCR 等分子方法检测的病毒颗粒。这些方法与确认分析（例如核酸杂交或核苷酸测序）相结合，可用于确定水中是否存在病毒，即使病毒含量非常低。然而，这些测试并不能最终确定病毒是否具有传染性或非传染性。目前检测水样或浓缩物中传染性病毒的标准方法是进行两次传代细胞培养，以确认细胞病变效应 (CPE)。不会检测不会引起 CPE 或复制有限的病毒。此外，该程序需要数周时间，而且成本高昂。通过评估受感染细胞中是否存在病毒核酸，可以获得细胞培养中无需重复传代即可复制的证据；然而，需要测试稀释度才能证明复制。我们已经开发了分子方法，可以直接确认细胞培养中正义单链 RNA 病毒的复制或活力，无论它们是否具有产生 CPE 的能力。具有此类核酸的关键肠道病毒病原体包括肠道病毒（柯萨奇病毒、埃可病毒和脊髓灰质炎病毒）、杯状病毒、甲型肝炎病毒和戊型肝炎病毒以及星状病毒。在这些病毒复制期间，会产生互补的负链，该负链主要与正链配对，作为受感染细胞中的复制中间 RNA。检测到负链或含有正链和负链的双链复制形式 RNA 复合物是病毒复制的证据。我们开发了 RT-PCR 方法，以柯萨奇病毒 B3 作为模型病毒，检测受感染培养物中的负链或双链形式的病毒 RNA。CVB3 的特异性引物对用于检测负链。通过使用泛肠道病毒引物检测双链形式，我们已证明在感染后 24 小时内可以检测到低至 4 个感染单位。我们开发的方法有望成为快速、灵敏且特异的分子检测水源水和饮用水供应中传染性人类肠道病毒的方法。包括 18 篇参考文献、表格和图片。

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