T/ZGXX 0004-2022
日化产品长效抑菌效果的评价方法

Evaluation method of long-term antibacterial effect of daily chemical products


 

 

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标准号
T/ZGXX 0004-2022
发布
2022年
发布单位
中国团体标准
当前最新
T/ZGXX 0004-2022
 
 
适用范围
11 抑菌效果试验 11.1 试样的接种 每2片试样或2片对照样为一组,分别取2组对照样和1组试样,放置于3个空的无菌培养皿内,各滴加0.25mL试验菌悬液(9),要求试验菌悬液在试样和对照样上尽量铺展均匀。2组对照样分别用于接种后立即洗脱并测试,以及培养一段时间(t小时)后洗脱并测试;1组试样用于培养一段时间(t小时)后洗脱并测试。细菌培养时间t应不低于18 h,同时接种后立即洗脱对照样的回收菌落数应在(1×104)CFU/组布~(9×104)CFU/组布范围。 11.2 立即洗脱  用无菌镊子夹取刚刚接种细菌的1组对照样,投入到1个含10mL细菌洗脱液(7.8)的均质袋中,在拍打匀浆机内拍打1min,将细菌从载体上洗脱下来。 如无拍打匀浆机,可将对照样转入含10mL细菌洗脱液(7.8)的100mL无菌三角瓶中,用手摇晃30s(摆幅约30cm),将细菌从载体上洗脱下来。实验室可根据实际情况调整细菌洗脱液(7.8)的用量至20mL。 11.3 接种试样继续培养与洗脱  将放置有接种试验菌悬液载体的2个无菌培养皿(一个装有2片试样,一个装有2片对照样)盖上培养皿盖,用保鲜膜封口,以防载体上的液体蒸发。在合适的温度下于恒温恒湿培养箱(6.1)培养t小时。期间培养箱相对湿度应控制在85%以上,培养温度根据接种的细菌确定。 培养结束后,将试样和对照样分别投入到含10mL细菌洗脱液的均质袋中,在拍打匀浆机内拍打1min,将细菌从载体上洗脱下来。 如无拍打匀浆机,可将试样和对照样分别转入含10mL细菌洗脱液(7.8)的100mL无菌三角瓶中,用手摇晃30s(摆幅约30cm),将细菌从载体上洗脱下来。实验室可根据实际情况调整细菌洗脱液(7.8)的用量至20mL。 11.4 试样活菌数的测定 用移液器移取1mL洗脱液(11.2或11.3),移入含9mLPBS(7.5)的试管内,充分振荡。从该试管中吸取1mL样液,注入另一含9mLPBS(7.5)的试管内充分振荡(或作适当稀释后,取其中2~3个稀释度的稀释液)。以此类推,对11.2和11.3的洗脱液分别做10倍梯度稀释。每移取一次,更换一次吸头。 用移液器从系列稀释的各试管吸取1mL样液注入平皿内,再倒入约45℃的TSA培养基(7.3)15mL-20mL,盖好盖子,转动平皿,使其充分混匀,在室温下放置至凝固后,将平皿倒置,在生化培养箱(6.2)中培养48h,计数菌落数。培养温度根据接种的细菌确定。 若接种低稀释度样液的平板无菌落生长,但接种高稀释度样液的平板有菌落生长,按无菌落生长计数。若不同稀释度平板间菌落数不成梯度,则以低稀释度平板菌落数计数。 11.5 平行试验 按照11.1~11.4的实验步骤,重复操作3次。 12 结果计算和评价 12.1 实验有效性评价 细菌增长值F 按式(1)计算,当F大于或等于1.5时,当次试验判断为有效。 F =lgCt-lgC0  ………………………………(1) 式中: F——对照样的细菌增长值; Ct——对照样接种并培养t小时后测得的细菌数; C0——对照样接种后立即测得的细菌数。 12.2 抑菌率的计算 抑菌率X 按式(2)计算。    ………………………  (2) Ct——对照样接种并培养t小时后测得的细菌数; Tt——试样接种并培养t小时后测得的细菌数。 取三次测试平均值,结果保留一位小数。 12.3 结果的表达 以抑菌率的计算值作为结果。当抑菌率计算值为负数时,表示为“0.0%”,当抑菌率计算值>99.9%时,表示为“>99.9%”。 12.4 长效抑菌效果的评价  当抑菌率≥90%,样品有t小时长效抑菌效果。当抑菌率≥99%,样品有良好的t小时长效抑菌效果。

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