二苯胺法测定DNA含量【实验目的】 掌握二苯胺法测定DNA含量的原理和方法 【实验原理】 DNA分子中2-脱氧核糖残基在酸性溶液中加热降解,产生2-脱氧核糖并形成ω-羟基-γ-酮基戊酸,后者与二苯胺试剂反应产生蓝色化合物,其反应如下图。蓝色化合物在595nm处有最大吸收,且DNA在40µg ~400µg范围内时,吸光度与DNA浓度成正比。在反应液中加入少量乙醛,可以提高反应灵敏度。...
向每支样品管加2.0 ml 样品液及4.0 ml 二苯胺试剂, 60 ℃ 保温1 h , 冷却后于595 nm 处比色测定, 以对照管调零点。根据测得的光密度值从标准曲线上查出相应光密度的DNA 含量, 按下式计算DNA 百分含量。 展开...
注意事项 二苯胺试剂具有腐蚀性,且二苯胺反应产生的蓝色不易褪色,操作中应防止洒出,比色时,比色杯外面一定要擦干净。...
仪器条件色谱柱250mm*4.6mm*5mm流动项等度:甲醇/20mmol/L乙酸铵溶液(80/20)柱温35℃流速0.8ml/min检测波长280nm与283nm进样体积30μl实验结果二苯胺的色谱图(0.05μg/ml)二苯胺空白对照品溶液与0.05μg/ml 二苯胺溶液叠图从实验结果中得知,0.05μg/ml 二苯胺溶液的S/N= 34.23,信噪比不小于10;空白对照品溶液中无二苯胺检出,说明本方法具备有良好的专属性...
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