ASTM F2149-01(2007)
细胞自动分析的标准试验方法.单细胞悬浮液计数和分级的电敏域法

Standard Test Method for Automated Analyses of Cells-the Electrical Sensing Zone Method of Enumerating and Sizing Single Cell Suspensions

被代替

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标准号

ASTM F2149-01(2007)

发布

2001年

发布单位

美国材料与试验协会

替代标准

ASTM F2149-16

当前最新

ASTM F2149-16

 

 

适用范围

该测定用于大学组织培养实验室、政府研究以及医院、生物医学和制药实验室，以自动进行细胞计数和大小测定。该仪器可为任何组织培养设施提供非常快速、准确且精确的结果。此外，如上所述，由于仪器要分析的细胞大小是由用户设置的，因此实际上可以对任何细胞种类和细胞类型进行分析；它不限于人体细胞或血细胞。电感应区方法于 20 世纪 50 年代中期引入 (9)。从那时起，已经有了重大改进，提高了操作员的易用性。其中包括取消水银压力计、缩小尺寸、提高自动化程度以及提供全面的统计计算机程序。与使用标准计数室、血细胞计数器进行的手动细胞计数相比，该仪器可提供快速结果。据了解，计数室的误差为 10% 至 30%，而且非常耗时 (10)。此外，在对猪肝细胞进行计数和大小测定时，Stegemann 等人得出结论，与传统的显微镜或基于细胞团的方法相比，自动化电传感区方法在计数和大小方面提供了显着更高的准确度、精密度和速度(7).1.1 如果了解其局限性，本测试方法涵盖了大多数所有细胞类型的计数和尺寸分布的测量程序。该仪器允许用户选择细胞大小设置，因此，该测试方法不限于特定细胞类型。该方法适用于悬浮以及贴壁细胞培养 ()。这是一种定量实验室方法，不适用于在线或现场使用。结果可以报告为每毫升细胞数或每体积分析的细胞悬浮液的细胞总数。计数和尺寸分布都可以用细胞微米直径或体积、飞升来表示。
1.2 常规分析组织工程医疗产品中常用的细胞()。例如软骨细胞 ()、成纤维细胞 () 和角质形成细胞 ()。 Szabo 等人使用该方法测量胰岛数量和体积 ()。此外，使用电传感区技术的仪器用于对放入中空纤维盒体外肝脏辅助系统中的猪肝细胞进行计数和大小分布分析。在这项研究 () 和其他研究 (, ) 中，与传统的手动方法（使用血细胞计数器在显微镜下进行视觉细胞计数）相比，自动电感应区方法明显得到验证，具有更高的准确度和精确度。该验证已在多种细胞类型中得到证实。此外，自动化程序快速、坚固且具有成本效益；它还最大限度地减少了手动技术中操作员之间固有的差异。
1.3 该仪器由多家公司制造；然而，所有的原理都是电阻抗。这种用于细胞计数和尺寸测定的测试方法基于对悬浮在导电液体中的细胞穿过小孔时产生的电阻变化的检测和测量（参见 ()）。当细胞悬浮在导电液体（例如磷酸盐缓冲盐水）中时，它们充当离散绝缘体。当细胞悬浮液通过一个小的圆柱形孔时，每个细胞的通过会改变位于孔两侧的两个浸没电极之间的电气路径的阻抗。 ......

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