ASTM E1398-91(2008)
鼠体内肝细胞DNA修复化验的标准作法

Standard Practice for In Vivo Rat Hepatocyte DNA Repair Assay

作废

标准号

ASTM E1398-91(2008)

发布

1991年

发布单位

美国材料与试验协会

当前最新

ASTM E1398-91(2008)

 

 

适用范围

化学诱导 DNA 修复的测量是评估化学物质到达并改变 DNA 的能力的一种方法。 DNA 修复是一个酶促过程，涉及识别和切除 DNA 化学加合物，然后进行 DNA 链聚合和连接以恢复 DNA 的原始一级结构 (6)。该过程可以通过测量掺入非 S 期细胞核 DNA 中的标记胸苷量来定量，通常称为非计划 DNA 合成 (UDS) (7)。人们已经开发出多种测定方法来测量啮齿动物和人类来源的各种细胞系和原代细胞培养物中化学诱导的 DNA 修复 (4)。原代培养大鼠肝细胞 DNA 修复测定已被证明在评估化学品的基因毒性活性方面特别有价值 (8)。基因毒性活性通常由化学物质的代谢物引起。体外大鼠肝细胞测定提供了一个系统，其中代谢活性细胞也是靶细胞。大多数其他体外短期基因毒性测试均采用大鼠肝匀浆 (S-9) 进行代谢激活，其在许多重要方面与肝细胞中实际发生的激活和解毒模式显着不同。关于体外 DNA 修复测定的使用有大量文献 (9-19)。进一步的进步是开发了体内大鼠肝细胞 DNA 修复测定，其中将测试化学品给予动物，并在从治疗动物分离的肝细胞中评估所产生的 DNA 修复 (20)。现在有许多系统可以测量整个动物特定组织中化学诱导的 DNA 修复 (4)。体内测定的平均结果是它们反映了整个动物中发生的摄取、分布、代谢、解毒和排泄的复杂模式。此外，可以使用这些系统研究诸如长期暴露、性别差异和不同暴露途径等因素。强效肝癌物质 2,6-二硝基甲苯 (DNT) 就说明了这一点。 2,6-DNT 的代谢激活涉及摄取、肝脏代谢、排泄到胆汁、肠道菌群还原硝基、再吸收以及肝脏再次进一步代谢，最终产生最终的遗传毒物 (21)。因此，2,6-DNT 在体外肝细胞 DNA 修复测定中呈阴性 (22)，但在体内 DNA 修复测定中是非常有效的 DNA 修复诱导剂 (23, 24)。组织特异性检测的一个问题是它们可能无法检测在其他靶组织中产生肿瘤的化合物的活性。例如，在使用强效诱变剂苯并(a)芘 (BP) 进行的体内 DNA 修复测定中没有观察到活性，可能是因为有限的组织分布和肝脏中更大的解毒作用产生的 DNA 加合物太少，无法产生可测量的反应 (3 ）。相比之下，BP 在组织特异性较低的体外肝细胞 DNA 修复测定中很容易检测到 (11)。关于使用体内肝细胞 DNA 修复测定的大量文献 (1-3, 5, 9, 25-33)。
1.1 本实践涵盖了进行大鼠体内肝细胞 DNA 修复测定的典型程序和指南。这里介绍的程序基于具有......的类似协议。