高效液相色谱分离纯化血管紧张素转换酶活性抑制肽

摘要:采用分步高效液相色谱法首次从菠菜核酮糖双磷酸羧化酶(英文缩写为Rubisco) 的胃蛋白酶2胰酶复合酶水解产物中分离纯化了血管紧张素转换酶(ACE) 活性抑制肽。水解产物经ODS 柱分离得到活性组分,这些活性组分再依次经过氨基柱(PhA) 、氰基柱(CN) 和硝基苯乙基柱(NPE) 4 种色谱柱分离后,得到4 种高度纯化的、具有抑制ACE 活性的多肽。经蛋白质序列自动分析仪测定,4 种多肽的结构分别为MRWRD ,MRW , IAYKPAG和LRIP2VA。采用固相多肽合成法分别合成了这4 种肽,并采用测定ACE 活性抑制率的方法评价其活性大小,结果其抑制ACE 活性50 %的浓度值( IC50值) 分别为211 ,016 ,412 和0138μmol/ L 。通过对照菠菜Rubisco 的氨基酸序列,确认IAYKPAG来自于菠菜Rubisco 的小亚基,而其余3 种多肽则来自于菠菜Rubisco 的大亚基。该法具有分离效率高、快速简单、干扰小、重现性好和不易丢失水解蛋白质中活性成分的优点。