构建小鼠肝细胞磷酸化蛋白质组分析鉴定的方法模型

摘要 背景：磷酸化蛋白质组的分析鉴定是目前蛋白质组学技术研究的主要目标之一，然而以质谱为核心的鉴定技术尚不完善。目的：建立一种简便易行、适于在一般实验室普及的分析鉴定磷酸化蛋白质组的方法并应用于小鼠肝细胞磷酸化蛋白质组的模型。设计、时间及地点：观察对比实验，于2003-07/2004-06 在泸州医学院生物化学教研室及医学分子生物学实验室完成。材料：封闭群乳昆明小鼠100 只，年龄1~3 d，体质量3~6 g，雌雄各半；32P-NaH2PO4 由中国北京原子能研究所提供。方法：将长势相当的体外培养的乳小鼠肝细胞随机分成两组。一组作同位素32P 标记后液氮终止反应，裂解细胞，收集蛋白并定量，双向电泳分离蛋白，干胶及放射自显影, 建立小鼠肝细胞磷酸化蛋白质组的放射自显影图谱，初步确定6 种靶标磷酸化蛋白EPs15 等；另一组直接裂解细胞，收集蛋白并定量，双向电泳分离蛋白后半干式电转移至PVDF 膜，根据靶标蛋白EPs15 等的理论等电点和分子量剪下6 张小膜。