猪乳中一高分子量蛋白质的分离纯化和鉴定

摘　要: 对猪乳中一高分子量蛋白(HMWP) 进行了分离纯化,并对其某些生化性质进行了鉴定。猪乳通过去脂得到脱脂乳,再去除酪蛋白得到乳清。对乳清进行硫酸铵分级盐析,猪乳中HMWP 在40 %饱和度硫酸铵盐析下有最大沉淀。收集40 %饱和度硫酸铵盐析沉淀,经过溶解、透析得到HMWP 的粗品。通过Mono Q 离子交换柱,对其粗品进行两次层析提纯,得到了HMWP 纯品,其纯度和得率分别为97. 85 %和12. 31 %。多种植物凝集素的Westernblotting 鉴定表明,HMWP 是一个糖基种类较少的糖蛋白,含有Man 和GlcNAc。SDS2PAGE 和凝胶过滤分别测得HMWP 的分子量为114. 8 kD 和115. 0kD。通过等电点测定,HMWP 的pI 为5. 10。HMWP 的氨基酸组分分析得知,其富含Asp 、Glu、Gly 和Cys ,疏水性氨基酸较低,仅占15. 59 %摩尔分数。这些结果说明HMWP 是一个易溶于水的、酸性的分泌性单体球蛋白。N 端氨基酸序列测定结果为Ala2Leu2Val2Gln2Ser2Gly2Leu2Asn2Leu2Val , 通过从网络Genbank 检索没有发现其同源蛋白的序列,说明其可能是一个新蛋白。