人胎盘来源的金属蛋白酶抑制因子23 的分离纯化及性质研究

摘要　目的　首次从人胎盘中分离纯化了天然型TIMP23 ,并建立了TIMP23酶联免疫测定方法。方法　人胎盘来源的TIMP23 的纯化,首先利用4Mol/ L 尿素Tris 缓冲液(pH8. 0) ,在除去多数水溶性蛋白的胎盘匀浆液中提取难溶性蛋白,然后经过CM52 阳离子交换树脂和Sephacryl S2200 凝胶过滤二步柱层析。结果　SDS 聚丙酰胺凝胶电泳显示最后分离结果,分别为27KD 和24KD 的两条蛋白带。Western blotting 结果表明,分子量为27KD 蛋白为N 末端糖化的TIMP23 、分子量为24KD 的蛋白为非糖化的TIMP23 、两者的比例约为1∶3 。对比尿素抽提液TIMP23 的纯化产率为24 % ,纯化倍数约为3200 倍。结论　纯化的天然型TIMP23 对MMP21 有明显的抑制活性。非糖化的TIMP23 IC50为1. 1 ×10 - 10M ,糖化的TIMP23 IC50为1. 2 ×10 - 10M ,显然比重组TIMP23 对MMP21 的抑制活性要高许多(rTIMP23 的IC50为1. 2 ×10 - 8M) 。研究表明, TIMP23 对某些肿瘤转移有明显的抑制效应。此项研究对进一步阐明MMPs 和TIMPs 在机体内平衡关系的改变对肿瘤浸润转移的影响作用有着重要的意义。