血小板第四因子在原核中的高效表达、分离纯化及活性测定

摘要:目的:构建重组表达质粒pET- 32cPPF4 ,并在原核中进行表达,以探讨其对白血病细胞系(HEL) 细胞增殖的作用。方法:通过PCR 方法从含有PF4 基因的PQE - 60PPF4 质粒中扩增PF4 ,用Nco ⅠPHind Ⅲ双酶切,克隆到原核表达质粒pET - 32C 中,使之在BL21 表达,Ni - Chelating Sepharose 亲和柱纯化,用细胞集落形成方法研究重组PF4 对HEL 的抑制作用。结果:菌株筛选后在大肠杆菌中获得可溶性高效表达,重组PF4 占菌体总蛋白的22 %。肠激酶酶切除去N - 端融合部分,获得了高纯度的重组人血小板第四因子(rh - PF4) ,纯度为95 %以上。活性实验发现重组PF4 可抑制HEL 细胞集落的形成,抑制率为47 %。结论:原核表达质粒pET- 32C可高效可溶性表达PF4 ,重组PF4 对HEL 细胞的增殖有抑制作用。