个人觉得有用，分享下
做了一阵子液相，慢慢的从无到有，从0到有些感性和理性的认识，常常有中感觉，或者是大彻大悟，或者是茅塞顿开，或者是有些慨然。。。觉得有必要写下来，算是个人的一些偶得和体会，希望能够对象偶一样得新手有所启发和帮助。
HPLC分析大致说来由三部分组成：样品制备，液相条件摸索，数据处理。
前两者是决定性得，raw data出来了，任怎样处理，只是修饰性得工作，当然REPORT做得漂亮，也是很重要得，毕竟是直接给人看得。
1、样品制备往往很多时候人们忽略样品制备得重要性，尤其是对于
中药。偶就是这样子，一上来只想的去摸条件，去改变仪器得东东，却忽视了一旦样品制备了，很多决定性得东西就在里面，任你
色谱条件如何都改善和美化不了得。更而且，好得样品处理方法可以省去液相很多麻烦。想想也是，毕竟很多时候一个好得条件真的很难得，然而却可以在样品前处理或制备过程中解决掉。如果偶做得多了，有了例子来证明，也许更有说服力。偶会注意积累的。
样品的制备主要包括以下几个内容：
- 样品采集：对于中药，如果以制定质量标准为目的，则需要注意采集时间，地点，部位，甚至规格
- 样品保存：常常我们不会在采集到后马上处理，所以要注意样品的保存，一般偶觉得应该阴干后放到干燥通风处，如果是特殊样品则需特别处理。
- 样品提取制备
- 样品净化：包括一系列的处理过程，有时候和提取是同步的
- 样品最后所用溶剂
偶觉得选择最优条件的原则有如下：
A）目的是定性还是定量，或者半定量：若定性，则不要求提的非常干净；若定量，则要注意是否提取完全
B）是
检测某一类，某一个化合物还是，还是什么都要。这和定性定量有相通之处。前两者要求针对这种化合物，这类东东选择溶剂，而后者则是选择一个尽可能都提的出来的溶剂，比如甲醇。这一项同样也决定了提取方法。比如挥发油类一般用SOXLET
C）在可以的情况下，尽可能选择和流动相相同的溶剂溶解样品。当然一般开始没有摸色谱条件时不知道哪个溶剂系统适合，但是当流动相确定后则可以反过来调整。这样可以尽量避免溶剂峰。
1、换柱子时不要心不在焉哦，不然很容易忘记注意FLOW的方向。。。
2、注意记录，每个色谱图对应的色谱条件，以备将来查阅。详尽的
试验记录是个好的习惯，偶就是开始大大咧咧什么都没记，到后来才去一个一个的看，查对，FT，真的会晕的。现在老老实实记录，不会花费多少时间，永远不要过于自信自己的记性哦
3、如果是PDA记得观察你的谱图是在哪个波长下哦，偶就是本该在203下看的，却忘记选择波长，于是看到很令人伤心的谱峰，幸亏后来发现了，及时更正，塞，多好的条件啊，差点错过，汗。。。。
4、经常检查洗针和洗泵头的瓶子里是否空了，因为它们的消耗量也是很大地。。。。不然。。。针不能洗了，你说会有什么后果哩？？？
关于液相的经济帐偶不是很多考虑经济的问题，但是有时候仔细想想这个帐的意义还是很大的
很多人不喜欢用乙腈，原因有三：1）毒，虽然甲醇也毒。2）贵。3）难回收，这个是针对制备。
但是乙腈却有它自己的优点：
1）对UV检测干扰小，尤其是边缘吸收的化合物，可在185－205范围内检测
2）粘度小，柱压底，溶剂强度稍高
3）乙腈虽然毒，但是它的毒性仅为抛光醇的十分之一。
4）虽然贵，但是
分析一个样品的造价仅比甲醇高2－4％（根据文献）
所以，这样看下来，乙腈还是很好地。。。。
还有呢，就是国产还是进口的问题。偶觉得，开始觉得当然是进口好啊，但是现在不这样认为了。第一：摸条件本身就是试验，拿进口色谱纯的乙腈一瓶一瓶灌，时间长了才发现用的不少呀，可不比灌水咯； 第二：两者相差价格太大，太大。也许可以用国产的摸好条件再用进口的。。。。不过有些罗嗦，而且一个液相的大拿曾经和偶说：进口，国产，差不多，区别就是国产地要滤滤干净，进口地似乎好些，可以省事。。。。汗。偶宁愿多劳动，省很多呢
不过突然想到前面提到的这个想法可以在制备上用。制备真的好费好费，FT,简直是喝溶剂，虽然在分析上摸条件好了，但是制备上还是有不同，需要再摸的，所以可以用国产。。想到偶当初一瓶瓶的灌进口不知灌了多少瓶，
再汗ING
Some tips:
1.generally, when we run a sample set, i think its better for us to set the injection times of the first row to be 2 because i have met some conditions that all the samples in the same sample set has a perfect reproducibility but the first one. i think there r many factors involved in, such as the condition of the colomn and the UV lamp, or the suitibility of the whole system. so, i consider its a better choice for us to let the first sample run two times to achieve a good result. it is a good method for us to check out wether the variety between the first row and the others comes from the sample itself or comes from our system unstability.
2. very often the injection volumne is 10 ul in HPLC. but in my own experience, i have to inject some volumes like 1,2,3,4 ul, and i found that the accuraccy is poor, although i got a R and R^2 of something like 0.9998, especially when the injection volume is below 1 ul, the accuraccy is too poor to be trusted and validated. so, its reasonable to inject the common 10ul i think, and better for us to avoid a small injection volume.
3.when we make sample preparation, better for us to chose glass flask and bottles but avoid the plastic ones, especially when we prepare standard liquid in which there are small amount of standards and easily to be affected by impurity.
4.是这样子的。最近做液相，重现性不是很好。不知道是什么原因开始。在丁香里也看到很多战友的重现性不好的。保留时间倒是没问题，问题出在峰面积，差异比较大。后来终于发现了，因为自己偷懒，每次都冲到没峰出来，就直接用下次的初始条件平衡。但是
分离度总会有差异。如果每次用甲醇冲足够的时间，再平衡足够的时间，问题就解决了。看来，偶这种偷懒是非常非常地不可取的哦。。。大家不要学我。。。。因为真的浪费了好多时间啊。。。。
1）定量中常常遇到这种情况，要确定对照品的峰。可以参考文献。但是在自己做的时候，最好还是验证一下。如何验证呢，就是把标准品加入到样品中去，看看哪个峰增强了。当然，还要考察不同的流动相条件，看是否一个风变成了两个峰。这是偶失败后得出的结论。因为难排除刚好在你的色谱条件下两个不同的化合物RT相同的情况。当然，它们的紫外光谱也是个参考。但如果都是同类化合物，如皂甙的话，就难说了。偶觉得这一条很中药，真的很重要。。。。。。。。。。。。。。。
2）定量分析的样品前处理中，尽量减少操作步骤。偶的意思是，如果可以一下子稀释30倍，就不要先稀释6，再稀释5，因为这样在操作取样过程中很多损失的可能。很浅显的道理，但是，偶是犯了错误才想到的。
P.S.:选择适当的容器和移液方法也很重要，比如同样是20ML，用注射器就比用移也管要准确。
3）关于做定量：
如果等度可以得到满意的分离效果，尽量不要用梯度，梯度是实在没有办法的选择。因为即使有柱温箱，由于泵的混合或者流动相变化也会引起基线漂移或者RT变化，是件很麻烦的事情
