家蚕丝腺蛋白质组学研究方法的建立

摘　要　通过高精度的双向电泳技术对家蚕中部丝腺组织的蛋白质进行分离,采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix2assisted laser desorption/ ionization time of flight mass spectrometry ,MALDI2TOF2MS) 对其中一些表达量较高的蛋白点进行鉴
定,并利用GPMAW(General ProteinPMass Analysis for Windows) 软件结合家蚕基因组预测的蛋白质数据库构建本地的肽质量指纹图谱数据库,对所得到的肽质量指纹图谱进行分析。研究发现,经过双向凝胶电泳及其图象分析技术,硝酸银染色和考马斯亮蓝染色分别能分离出500 个以上和100 个以上的蛋白点。这些蛋白质点主要集中在分子量15～90kD 区域,等电点pH 315～7 之间。MALDI2TOF2MS 鉴定的25 个考染蛋白点中有60 %以上的PMF(Peptide Mass Fingerprint) 的信号峰较强。在数据库检索过程中,利用家蚕肽质量指纹数据库所得检索结果与在Mascot 的检索结果相比,前者不仅能够准确鉴定出一些已有研究报道的蛋白,从而验证检索方法的可行性,而且还能够对一些已经被家蚕基因组数据库所预测但未曾报道的新蛋白质进行鉴定,从而建立了一整套适合于家蚕蛋白质组研究的方法,并为其它绢丝昆虫蛋白质组研究提供了重要参考。