马蹄内翻足大鼠模型踝部骨骼、组织及脊髓蛋白质组学分析

【摘要】　目的　应用全反式维甲酸(all2trans retinoic acid ,ATRA) 诱发Wistar 大鼠马蹄内翻足模型为实验材料,应用蛋白质学技术探讨先天性马蹄内翻足发病机理。方法　按135 mg/ kg 体重经口给予孕10 天Wistar 大鼠ATRA ,孕21 天剖检胎鼠,提取畸形鼠和对照鼠脊髓、踝部组织(去除皮肤) 及踝部骨骼总蛋白,双向电泳分离蛋白,考马斯亮蓝染色,PDQuest 软件、质谱及生物信息学分析差异蛋白。应用半定量逆转录PCR 检测马蹄内翻足畸形鼠和对照鼠脊髓、踝部骨骼和胫骨后肌群组织xiap col2α1、tnnt1 和ngf r 基因表达。应用免疫组化染色检测Xiap 蛋白表达。应用TUNEL 法进行脊髓、踝部骨骼细胞凋亡检测。结果　经双向电泳发现马蹄内翻足模型胎鼠多种蛋白质表达存在差异,质谱及生物信息学进一步分析发现Ⅱ型胶原蛋白等16 种蛋白表达发生改变。逆转录PCR 检测进一步证实xiap 、col2α1 在脊髓、踝部骨骼和胫骨后肌群组织表达下调, tnnt1 在踝部骨骼和胫骨后肌群组织表达下调, ngf r 在以上组织表达无异常。免疫组化染色进一步证实Xiap 蛋白表达下调。神经、骨骼细胞凋亡发生率是对照组细胞凋亡发生率的5. 4 和10倍。结论　马蹄内翻足大鼠模型踝部组织(去除皮肤) 、踝部骨骼及脊髓多种蛋白质存在表达差异。Xiap 、Col2α1 和sTnT与马蹄内翻足相关,Ngfr 与马蹄内翻足无关。ATRA 可以诱导脊髓、骨骼凋亡发生率升高,与Xiap 表达下调有关,在马蹄内翻足发生过程中发挥重要作用。