人肝癌细胞株QGY27701亚细胞蛋白质组双向电泳技术的建立

提　要: 目的　优化人肝癌细胞株QGY27701的蛋白质样品制备方法,建立其亚细胞蛋白质组双向电泳技术。方法　分步提取人肝癌细胞株QGY27701细胞质、细胞膜和细胞核蛋白,采用不同的方法除盐、浓缩样品,然后分别采用2种不同的水化上样缓冲液重悬样品,进行双向凝胶电泳。结果　使用三氯乙酸/丙酮的除盐效果好,样品损失少;采用上样缓冲液(7 mol/L尿素+ 2 mol/L硫脲+ 4%CHAPS + 40 mmol/L Tris + 65 mmol/L DTT + 2%两性电解质)有利于蛋白的溶解,获得更多的蛋白信息,检出的细胞质蛋白点数可达(995 ±53) ,细胞膜蛋白点数可达( 1 035 ±58) ,细胞核蛋白点数可达(893 ±45) 。结论　获得了清晰的人肝癌细胞株QGY27701亚细胞蛋白质组双向电泳图谱。