人偏肺病毒分离株蛋白质特性的初步探讨

【摘要】目的: 初步明确人偏肺病毒( Human metapneumovirus , hMPV) 主要蛋白质的基本特性。方法: 以纯化的hMPV 重庆分离株CHN05- 01 灭活病毒为抗原, 免疫家兔获得抗血清。用此抗血清为一抗通过免疫印迹法检测hMPV 蛋白。用NetNGlyc 1.0Server、NetOGlyc 3.1 Server、NetPhos 2.0 Server 分析hMPV A 型标准株CAN97- 83 氨基酸序列, 预测hMPV 蛋白氨基酸序列中可能的糖基化、磷酸化位点。结果: ELISA 检测显示所制备的抗血清与hMPV 的蛋白反应效价达1: 500 以上, 可有效识别hMPV蛋白。软件分析示G 蛋白糖基化位点最多, 而P 蛋白磷酸化位点最多。以兔抗hMPV 血清为一抗的免疫印迹法提示CHN05- 01的G 蛋白糖基化水平较一致, 与CAN99- 80 和CAN99- 81 不同, 其分子量介于55 至72ku 之间, 约68ku; F 蛋白F1 亚单位分子量介于40 至55ku, 约为48ku。结论: 初步明确了hMPV 两个主要膜表面糖蛋白的分子量和糖化特点, 为后续蛋白功能研究奠定了基础。