小鼠晶体蛋白质组的双向电泳和质谱鉴定研究

【摘要】　目的　应用双向电泳和质谱技术研究5 周龄小鼠晶体蛋白质组。方法　提取小鼠晶体总蛋白,进行固相pH梯度( IPG) 等电聚焦双向电泳,胶体考马斯亮蓝R2250 染色,使用PDQuest 7130 图像分析软件分析电泳图像。选择主要蛋白点胶上酶解,应用基质辅助激光解析电离飞行时间P飞行时间(MALDI2TOFPTOF) 仪器进行串联质谱(MSPMS) 鉴定。结果　上样量为882μg 和190μg 时,分别检测370 ±41 蛋白点(n = 3) 和57 ±5 个蛋白点(n= 3) 。高上样量能够较好地分离晶体低丰度蛋白,如念珠状纤维结构蛋白BFSP;低上样量可很好地分离高丰度蛋白—晶体蛋白(包括αA、αB ;βA1～βA4 ;βB1～βB3 ;γA～γF 和γS 等) 。质谱鉴定得到1 种细胞骨架蛋白和16 种高丰度晶体蛋白。结论　双向电泳和质谱技术有效考察了晶体总蛋白质,为分析白内障形成过程中蛋白质的表达改变提供了新的方法和途径。