异育银鲫Toll 样受体3 的cDNA 序列分析与蛋白质高级结构预测

摘要: 利用RT2PCR、RACE 及克隆等方法获得了异育银鲫Toll 样受体3 (cagTLR3) 基因全长cDNA 序列。该cDNA 全长3170 bp , 5′端非编码区181 bp ; 3′端非编码区283 bp ; 开放阅读框(ORF) 2706 bp ,编码901 个氨基酸。经序列同源性分析显示,其编码的氨基酸序列与金鱼、斑马鱼、斑点叉尾　、虹鳟和红鳍东方　有较高的相似性,其相似性分别为92 %、88 %、79 %、75 %和72 %,说明TLR3 在长期的进化中具有较高保守性。TLR3 全长序列起始21 个氨基酸残基为信号肽;50 至695 个氨基酸残基间包含15 个富含亮氨酸的重复序列(LRR) ; 704 至726 个氨基酸残基为跨膜区( TM) ;754 至897 个氨基酸残基为与白介素- 1 受体高度同源的区域( TIR) 。将异育银鲫TLR3 与人和斑马鱼胞内TIR 结构的氨基酸比对后发现, Phe728、Leu738、Tyr756 与Arg736 在TLR3 的信号转导及胞内定位过程中起到关键作用。异育银鲫TLR3 胞外配体结合域的三维结构呈U 型,与人TLR3 的相应结构十分相似,在N 端具有1 个二硫键,C 端有2 个。因LRRs 上的插入序列和14 个糖基化位点,异育银鲫TLR3 胞外配体结合域内表面的大量β2折叠结构呈平坦的平面。