乳、乳制品及饲料中三聚氰胺的色谱测定

上一篇 / 下一篇 2010-05-06 10:14:36

　　1.三聚氰胺理化性质

　　三聚氰胺：英文名“melamine”，简称三胺，学名三氨三嗪，别名蜜胺、氰尿酰胺、三聚酰胺。分子式：C3N6H6、C3N3(NH2)3;分子量：126.12;物理性能：白色结晶粉末，无毒，无味;相对密度：1570kg/m³;熔点：在常压下，354℃分解;升华温度：300℃;溶解性：能溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶;微溶于水、乙醇;不溶于乙醚、苯和四氯化碳，水溶液呈弱碱性。

　　化学性能：三聚氰胺是一种重要的氮杂环有机化工原料，显弱碱性，能够与各种酸反应生成三聚氰胺盐;在强酸或强碱液中，三聚氰胺发生水解，胺基逐步被羟基取代，生成三聚氰酸二酰胺、三聚氰酸一酰胺和三聚氰酸;三聚氰胺与醛类反应生成加成化合物;三聚氰胺与甲醛反应制成树脂，三聚氰胺树脂是一种多种用途的材料，防火耐热且有很高的稳定性，用于生产塑料、地板砖，厨房用具，防火纤维，商业滤膜，胶水和阻燃剂。

　　2. 乳制品

　　是指以生鲜牛(羊)乳及其制品为主要原料，经加工而制成的各种食品。本标准所指的乳制品包括液体乳类(杀菌乳、灭菌乳、酸牛乳、配方乳)、乳粉类(全脂乳粉、脱脂乳粉、全脂加糖乳粉和调味乳粉、婴幼儿乳粉、其他配方乳粉)、含乳饮料类、炼乳类(全脂无糖炼乳、全脂加糖炼乳、调味炼乳;配方炼乳)、乳脂肪类(稀奶油、奶油、无水奶油)、干酪类(原干酪;再制干酪)、乳冰淇淋类(乳冰淇淋、乳冰)和其他乳制品类(干酪素、乳糖、乳清粉、浓缩乳清蛋白)等。

　　二.高效液相色谱法测定

　　1. 原理

　　试样经溶解、超声提取、沉淀蛋白、过滤得到测试液，经高效液相色谱测定，根据保留时间和紫外吸收光谱定性，根据峰面积进行定量。

　　2 试剂

　　方法中所用试剂，除另有规定外，均为分析纯试剂，水为GB/T 6682-2008中一级用水，溶液为水溶液。

　　2.1 磺基水杨酸。

　　2.2 柠檬酸。

　　2.3 辛烷磺酸钠：高效液相色谱离子对试剂。

　　2.4 乙腈：色谱纯。

　　2.5 盐酸。

　　2.6 60 g/L磺基水杨酸：称取60 g磺基水杨酸用水定容至1 L。

　　2.7 0.1 mol/L盐酸：量取8.3 mL盐酸用水稀释至1 L。

　　2.8 缓冲液：柠檬酸和辛烷磺酸钠浓度均为10 mmol/L。

　　2.9 三聚氰胺标准品：已知含量大于99%。

　　2.10 标准储备液：称取三聚氰胺标准品0.01g(准确至0.0 001g)，用甲醇配制成浓度为1mg/mL标准储备液。

　　2.11 标准系列：将标准储备液用0.1 mol/L盐酸逐级稀释至0.25µg/mL，0.50µg/mL，1.00 µg/mL，2.00 µg/mL，4.00 µg/mL，5.00 µg/mL，10.0 µg/mL的系列标准溶液。

　　3 仪器成套性

　　3.1 高效液相色谱仪

　　3.1.1 P3000型高压输液泵

　　3.1.2 UV3000紫外检测器

　　3.1.3 Rehodyne手动进样阀 (20μl)

　　3.1.4 CXTH3000色谱工作软件

　　3.1.5 ODS(VenusilASB-C18色谱柱) 250 mm×4.6 mm，5 µm

　　3.1.6 分析启动工具包

　　3.1.7 溶剂托盘

　　3.1.8 试剂包

　　3.1.9 保护柱和柱芯

　　3.1.10真空固相萃取装置(含混合型的阳离子交换柱10根)

　　3.2 溶剂过滤器(含真空泵)

　　3.3 超声波清洗器

　　3.4 柱温箱

　　3.5 高速离心机：转速>4 000 r/min

　　3.6 旋涡混匀器

　　3.7 分析天平：感量0.1mg

　　4 样品处理

　　4.1 固态乳制品

　　称取1.0 g左右试样(准确至0.0 001 g)，加入0.1 mol/L 盐酸约15 mL，涡旋混匀，超声提取30 min后加入60 g/L磺基水杨酸6 mL ~8 mL，用0.1 mol/L 盐酸定容至25 mL，混匀后离心，上清液经0.45 µm的微孔滤膜过滤后进样。

　　4.2 液态乳制品(包含酸奶)

　　称取15 g左右试样(准确至0.0 001 g)，加入60 g/L磺基水杨酸3 mL~4 mL，用0.1 mol/L 盐酸定容至25 mL，混匀后离心，上清液经0.45 µm的微孔滤膜过滤后进样。

　　4.3 饲料

　　称取1.0g左右试样(准确至0.0 001 g)，将样品用研钵充分碾碎混匀，加入0.1 mol/L 盐酸约15 mL，涡旋混匀，超声提取30 min后加入60 g/L磺基水杨酸6 mL ~8 mL，用0.1 mol/L 盐酸定容至25 mL，混匀后离心，上清液经0.45 µm的微孔滤膜过滤后进样。

　　5 测定步骤

　　5.1 色谱条件

　　5.1.1 色谱柱：ODS或C8，250 mm×4.6 mm，5 µm。

　　5.1.2 流动相：缓冲液︰乙腈=85︰15。

　　5.1.3 流速：1.0 mL/min。

　　5.1.4 柱温：40 ℃。

　　5.1.5 波长：240 nm。

　　上述色谱条件是典型的，可根据实际情况做具体调整。如果分离效果不理想，将水相改为：柠檬酸和辛烷磺酸钠浓度均为10 mmol/L，加3mL三氯乙酸，配制成1000mL溶液，流动相用氨水调PH值3.9到3.95。

　　5.2 测定

　　5.2.1 标准曲线制备

　　将标准系列0.25µg/mL，0.50µg/mL，1.00 µg/mL，2.00 µg/mL，4.00 µg/mL，5.00 µg/mL，10.0 µg/mL分别进样20 µL,以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标作图，制作标准曲线。

　　5.2.2 样品测定