紫外可见分光光度法——定性及定量分析方法

　　一. 定性分析

　　选择合适的溶剂(非极性)，使用有足够纯度单色光的分光光度计，在相同的条件下测定相近浓度的待测试样和标准品的溶液的吸收光谱，然后比较二者吸收光谱特征：吸收峰数目及位置、吸收谷及肩峰所在的位置( l )等;分子结构相同的化合物应有完全相同的吸收光谱。

　　二. 定量分析

　　(一)单组分定量分析方法

　　1. 标准曲线法：配制一系列(5~10)个不同c的标准溶液 ，在适当l —— 通常为 lmax下，以适当的空白溶液作参比，分别测定A，然后作 A-c 曲线同条件下测定试样溶液吸光度 Ax ，查找对应的 cx 。

　　2. 直接比较法：已知试样溶液基本组成，配制相同基体、相近浓度的标准溶液，分别测定吸光度A标、A样

　　根据 L-A 定律： A标 = K · b · c标 A样 = K · b · c样

　　则

　　(18)

　　(二)多组分定量分析

　　混合组分的吸收光谱相互重叠的情况不同，测定方法也不相同，常见混合组分吸收光谱相干扰情况有以下三种：

　　图5 混合组分吸收光谱的三种相干情况示意图

　　1.第一种情况：各种吸光物质吸收曲线不相互重叠或很少重叠，则可分别在l1 及 l2 处测定 a 及 b 组分的 c;

　　2. 第二种情况 部分重叠：先在 l1 处测得 ca ,再在 l2 处测得混合组分的吸光度 Aa+b ，根据吸收定律加和性：

　　即可求得cb。[应先求得 ea(l2 ) ，与 ea(l2 ) ，并使用相同 b ]

　　3. 第三种情况:两吸收曲线互相重叠，但服从 L-B 定律

　　(1) 解方程组法：

　　若试样中需要测定两种组分，则选定两个波长l1 及 l2 ，测得试液的吸光度为 A1和 A2，则可解方程组求得组分a、b 的浓度ca、cb ：

　　如果混合物含有 n 个组分，可不经分离，在 n 个适当波长处进行 n 次测量，获得 n个吸光度值，然后解 n 个联立方程以求得各组分的浓度。

　　(2)等吸光度双波长(消去)法

　　吸收光谱重叠的 d、e 两组分共存，现设法把一种组分(a)的吸光度消去。方法如下：

　　图6 二组分混合物吸收光谱用作图法选择l1、l2(双波长分光光度法)

　　选取两个适当的波长l1 和 l2 ，

　　使 e1d= e2d ，而

　　尽可能大，则用这两个波长l1 和 l2测得混合物溶液吸光度之差 ∆A 应只与 ce 成正比(而与cd无关)，直接测得ce ：

　　因为

　　所以

　　若用 1cm 吸收池

　　

　　若需测定另一组分 d 时，也可用同样方法，选择另一个l1’ 和 l2’ ，先消去的 e 的干扰，直接求cd