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hek293细胞培养出现的问题

293t细胞的培养

包装细胞293t细胞的培养一、293t细胞的冻存1. 随着传代的次数增加,293t细胞会出现生长状态下降,出现突变等。所以要在细胞购进时就进行大量冻存,以保证实验的稳定性和持续性。2. 在细胞对数生长期进行冻存,增加细胞复苏成活率。3. 倒去细胞上清液,加入d-hank's液洗去残留的培养基。4. 加入0.25%的胰酶,消化10-20s后倒去。5. 镜下观察细胞变圆,细胞间间隙加大时,加入新鲜培养基吹打混匀。6. 细胞计数。7. 将细胞离心,1000rpm,2min。8.根据计数结果加入细胞冻存液(70%完全培养基+ 20% fbs + 10% dmso)重悬细胞,密度为3×106个/ml。9. 分装进细胞冻存管,放入泡沫盒中,放入-80℃超低温冰箱。10. 第二天将细胞放入液氮灌,并记录。11. 复苏检测细胞存活率,细胞状态等,并记录。二. 293t细胞的传代1. 当细胞生长至汇合率达到80~90......

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