第二十七期质谱沙龙活动报道
2010年6月5日下午，第二十七期质谱沙龙活动在解放军第二炮兵总医院药剂科举行。来自解放军第二炮兵总医院、AB公司、北京师范大学分析测试中心、空军总医院、安贞医院的20余位专家、技术人员参加了此次沙龙活动。
第二十七期质谱沙龙活动现场
免疫抑制剂及其合并用药LC-MS/MS高通量检测方法研究
解放军第二炮兵总医院 李鹏飞老师
首先，来自解放军第二炮兵总医院的李鹏飞老师通过题为《免疫抑制剂及其合并用药LC-MS/MS高通量检测方法研究》的报告，向大家介绍了最近备受关注的使用液质联用技术进行免疫制剂方面的实验。李老师主要从事他克莫司免疫制剂的研究，包括开发他克莫司检测试剂盒。
李老师首先介绍了一下免疫抑制剂的研究背景。上世纪90年代比较注重的治疗药物监测(TDM)和60年代开始在临床应用的器官移植，都不同程度的促进免疫抑制剂的发展。而LC-MS/MS高通量能同时检测免疫抑制剂及合并用药在人血中的浓度，因此它的研究日益得到重视。
治疗药物监测(TDM)是对治疗指数窄、毒性作用强、个体差异大的药物，测定其血液或其他体液中的药物浓度，根据药动学原理制定个体给药方案。TDM药物的特点：安全范围窄，治疗浓度范围与中毒浓度很接近；无明显的、可观察的治疗终点或指标；剂量、药物作用之间的关系不可知；药物中毒与无效时均很危险等。器官移植成为21世纪医学发展的主要方向之一。免疫抑制剂作为器官移植学三大支柱之一，是器官移植成败的关键。目前在临床实践中实体器官移植尚不能彻底停用免疫抑制剂，因此器官移植依然处于免疫抑制剂时代，免疫抑制剂的长期应用及其不良反应的控制仍是临床移植医学研究的重点。常用的免疫抑制剂有：环孢素A(CsA)、他克莫司(FK506)、霉酚酸酯(MMF)、肾上腺糖皮质激素硫唑嘌呤。
LC-MS/MS高通量的意义在于能提供免疫抑制剂及合并用药的血药浓度，为临床个体化给药提供依据，为进一步验证或确认药物之间的相互作用提供方法支持，都是更好地为临床服务。
在实验中，李老师采用了3200QTrap型液相色谱-串联质谱仪，配有电喷雾离子源(ESI)以及Analyst1.4.2数据处理软件，和Agilent1100高效液相色谱系统等仪器。该试验分为五个阶段：第一阶段：建立拟测定药物各自的质谱条件；第二阶段：建立同时检测多种药物浓度的色谱条件；第三阶段：建立同时检测样本的前处理方法；第四阶段：定量分析方法的验证；第五阶段：用建立的检测方法检测未知生物样本。以下为上述五个阶段的分析方法：
第一阶段，建立拟测定药物各自的质谱条件。通过储备液配置，蠕动泵模式进样，找到各自优化条件；
第二阶段，建立同时检测多种药物浓度的色谱条件。包括流动相组成、色谱柱、流动相随时间变化(梯度)、柱温、进样量；
第三阶段，样品前处理及内标选择。生物样品前处理方法包括沉淀蛋白法、固相萃取法、液-液萃取法和固相微萃取法。内标的选择包括有1-2中不常用药物、1种非药物以及同位素内标这三种不同的选择，李老师在试验中选择沉淀蛋白法(甲醇)和1-2种不常用药物(替米沙坦)的内标法。
第四阶段，定量分析方法的验证。其中包括验证方法的专属性，标准曲线与线性范围，精密度与准确度试验，提取回收率和基质效应以及稳定性试验。
第五阶段，检测实际样本中，李老师采用二炮医院服用免疫抑制剂患者血浆样本30例检测结果，以及朝阳医院肾移植患者全血样本192例检测结果进行比较，得出比较可靠的结果。
在试验过程中，李老师也遇到了一些问题。比如，使用霉酚酸做试验时，由于标准样和实际样存在差异，血浆和全血中浓度可能不同。奥美拉唑和尼卡地平响应值太高，在高浓度值处接近质谱仪响应的上限，故响应与浓度不成比例，导致检测偏差较大等。
最后，李老师得出的结论为在《免疫抑制剂及其合并用药LC-MS/MS高通量检测方法研究》的课题中，采用LC-MS/MS高通量检测方法快速、灵敏，专属性强、重现性好，可以用于人体血浆中硫唑嘌呤、6-巯基嘌呤、泼尼松、泼尼松龙、甲基泼尼松龙、地塞米松、奥美拉唑、地尔硫卓、尼卡地平、非洛地平、霉酚酸的浓度测定。因此，在免疫抑制剂及其合并药的研究中越来越受到重视。
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报告下载：《免疫抑制剂及其合并用药LC-MS/MS高通量检测方法研究》
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