二氨基己基间隔物的结合实验
实验材料 | |
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试剂、试剂盒 | |
实验步骤 | 实验所需「试剂」具体见「其他」 连接间隔物的步骤与连接蛋白质相同(见「蛋白质与溴化氰活化的琼脂糖结合」),只是用 1 mg/ml(描述步骤用 20 mg/20 ml)1,6-己二胺代替蛋白质。用 0.5 mol/L NaCl 洗掉己基衍生物(AH-琼脂糖) 为将蛋白质连接在间隔物上,需用 1 mol/L HCl 将 pH 调节到 4.5。随后加入 N-乙基-N'-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(10 mg/ml 胶)和蛋白质(10 mg/ml)。最终 pH 必须保持 4.5。将混合物 4℃ 振荡过夜(1 h 后调整 pH)。最后用 0.1 mol/L pH 7.6 磷酸二氢钾冲洗凝胶。 展开 |
注意事项 | |
其他 | 试剂: 0.1 mol/L pH 7.6 磷酸二氢钾 1,6-己二胺(Mr=116.2) 0.5 mol/L NaCl(Mr=58.4;2.92 g/100 ml) N-乙基-N'-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC·HCl,Mr=191.7) 1 mol/L HCl 展开 |
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