【讨论帖】蛋白版畅谈自己课题，欢迎参与

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• wmp1234 (2013-10-22 15:42:50)

  我先说说我的：
  
  肺炎衣原体CPAF原核表达、免疫活性研究及其单克隆抗体的制备。
  
  1、CPAF原核表达
  
  通过基因克隆的方法，将重组载体PGEX6P/2转化大肠杆菌BL21中，在合适的条件下诱导其大量表达；
  
  2、CPAF重组蛋白纯化
  
  蛋白以包含体形式存在，使用亲和层析法纯化；
  
  3、免疫活性的研究
  
  重组蛋白免疫BALB/C小鼠，4w后采血ELISA测血清效价；GST单抗western－blot鉴定蛋白特异性；
  
  4、重组蛋白免疫BALB/C小鼠，常规免疫后进行融合试验，融合成功后经三次ELISA确定阳性克隆；扩大培养后免疫BALB/C小鼠大量生产；纯化免疫后得到的腹水；
  
  5、与重组蛋白、肺炎衣原体标准株western－blot；与沙眼衣原体、鹦鹉热以原体进行免疫荧光确定单抗与其他以原体无交叉反应；检测临床诊断为肺炎衣原体阳性感染病人的外周血单核淋巴细胞（MIF)并与美国进口肺炎衣原体单克隆抗体检测结果比较。

• qiangren789 (2013-10-22 15:43:28)

  我也参与一个：
  课题：Calvin循环多酶复合体的纯化与鉴定
  1、通过一些生化方法（分子筛层析，离子交换层析)纯化这一复合体
  2、通过各种电泳方法（PAGE、SDS-PAGE）鉴定这一复合体组分及其分子量
  3、对其结构进行分析（目前还没有做到这里，还没有想到好的方法呢）

• junjie05 (2013-10-22 15:44:08)

  
  积极参与：
  我的课题是关于蛋白质芯片方面的，目前做自身免疫性抗体检测芯片的研制．
  主要用于检测抗15~18种自身抗原抗体的检测，包括ANA谱，ccp,CENP-B,核小体等等．
  有些抗原可自己制备，如dsDNA等，有些需要重组表达，如CENP-B等，有些需要直接购买。
  目前的工作是在已有的基础上做的（师姐做过），但仍存在有很多问题需要解决。
  希望有相似课题的战友相互帮助，共同进步！

• taoshengyijiu (2013-10-22 15:44:53)

  
  我也来一个：
  主要从海洋药用贝类资源中纯化鉴定具有抗肿瘤作用的 蛋白或多肽
  1 ，蛋白的提取，分离,凝胶柱层析，超滤，FPLC等
  2 ，活性检测；主要是细胞筛选了
  3 ，蛋白鉴定，主要是MS ，以及N末端测序
  4 ，普遍的检测手段如，BCA，SDS-PAGE
  希望大家多多交流！

• 831226 (2013-10-22 15:46:04)

  
  我也来一个
  课题是与抗菌肽相关
  1 预测已有抗菌肽的共有的特点，如二级结构，氨基酸组成
  2 分析氨基酸组成与抗菌肽抗菌活性及溶血性之间的关系
  3根据分析结果，合成纯度大于95的抗菌肽进行抗菌活性和溶血性的分析。

• 2541 (2013-10-22 15:46:31)

  
  发现一段序列，在蛋白N端可以促进其在大肠杆菌中表达，构建没有这段序列的蛋白不能表达，或表达量很小，正在努力研究
  1。截断该序列，构建到蛋白中，看看怎么样
  2。或突变几个氨基酸，具体的还没有想好，请大家指点

• cj_mondy (2013-10-22 15:46:50)

  
  我的课题是关于病毒的受体鉴定方面的：
  1. 酵母表达病毒的表面膜蛋白；
  2. 以病毒易感的一种神经细胞膜蛋白建立噬菌体展示文库，利用表达的蛋白筛选病毒在这种神经细胞膜上的受体；
  3. 通过RNAi和免疫组化鉴定受体的作用与机体内的分布。
  
  斑竹：鼓励一下新战友，加分呀！呵呵！

• she (2013-10-22 15:47:22)

  
  相关疾病：
  心力衰竭
  冒个泡:我的课题是研究小鼠心肌肥厚和心衰过程中心肌细胞上一种钾离子通道的亚单位KV4.2的变化情况.大致步骤:
  1动物病理模型的建立
  2模型成功与否检测
  3WESTERNBLOT检测蛋白水平的改变
  4PCR检测mRNA水平的改变

• ROSE李 (2013-10-22 15:47:50)

  相关疾病：
  肿瘤
  我的研究课题是maspin对HDAC的抑制作用，及对肿瘤的影响。
  采用的技术手段有siRNA,chip,ip,gst-pull down,real time-rt-pcr,等

• yapuyapu (2013-10-22 15:48:29)

  相关疾病：
  再灌注损伤
  俺比较可怜，没有课题，支持版助，谈我熟悉的一个的领域
  肝脏缺血再灌注损伤
  1　缺血再灌注模型的建立和保护因素的使用
  2　损伤指标的检测（功能：ALT　AST，结构：光镜，电镜）
  3　氧化应激的检测（抗氧化酶活性，MDA活性）
  4　炎性反应的检测（RT、ELISA测炎性因子，western/EMSA测上游转录因子）
  5　中性粒浸润检测（免疫组化测ICAM等粘附分子，MPO活性/染色测中性粒浸润）
  5　细胞凋亡的检测（western测促凋和抑凋分子，TUNEL/DNA酶切图谱测凋亡）
  6　免疫荧光/细胞分离和共培养/基因敲除+骨髓移植/特异性细胞激活和抑制剂/最终确定效应细胞和效应分子。

• +小生怕怕+ (2013-10-22 15:48:54)

  我做的是一个抗菌肽（AMP)基因的原核串联表达（大肠杆菌）以及抗体的制备。
  1、原核表达
  前期工作中用pET32a表达我的AMP，由于融合的是TrxA蛋白，是增融的，所以目的蛋白的毒性完全表现出来，因此没能成功表达我的AMP。
  所以改变策略，打算用pET31b来表达，同时准备将我的AMP串联起来表达
  
  2、AMP重组蛋白纯化
  蛋白以包含体形式存在，使用亲和层析法纯化；
  
  3, 融合蛋白的酶切，纯化
  用CNBr切割融合蛋白，得到我得目的蛋白单片断。然后用反相色普，分子筛的方法纯化目的蛋白
  
  4、抗菌活性的研究
  检测表达的AMP的抗菌活性
  
  5、目的蛋白免疫小鼠，制备多抗（有条件可以制单抗）

• dongdongqiang (2013-10-22 15:49:13)

  凑个热闹，我是中途转过来做蛋白质组的，生化的东西不太懂，做得比较浅
  1. 中药作用下动物组织蛋白质表达差异，
  动物造模，给药，生化测定，2-D分析，蛋白鉴定，作用机制推断
  2. 植物蛋白质组分析， 主要是用蛋白组表达模型研究药用植物的亲缘性
  植物蛋白的提取纯化、2-D分析，蛋白鉴定，聚类树，与传统形态学分类结果比较

• mamamiya (2013-10-22 15:49:30)

  
  相关疾病：
  运动医学
  呵呵，惭愧，我是做运动医学方面的，目前方向是骨骼肌再生的蛋白质组研究：
  1.观察不同不同损伤方式、不同运动方式后快肌（胫骨前肌）与慢肌（比目鱼肌）蛋白质表达差异。
  2.观察用不同损伤方式作用后，以及不同运动方式后肌肉提取物对培养的成纤维细胞的影响。
  3.在以上得到初步确认后，观察一种从牡丹科植物当中提取到的活性成分对于与骨骼肌再生的作用，实验方法包括双向电泳、质谱分析、免疫组化、以及一些常规生化检测等。

• 8princess8 (2013-10-22 15:50:29)

  
  和大家多交流一下,也希望能有更多方向相近的人来一起共同讨论,共同提高.
  我的方向是海洋药物学.
  所做内容为:
  1.海洋抗菌肽在酵母和大肠杆菌中的表达,纯化.其中酵母是单纯表达,用PAGE检测,用离子交换柱纯化.而大肠杆菌是用的融合可溶性表达,过镍柱纯化,然后Xa因子蛋白酶切再纯化.
  2. 海洋抗菌肽抗肿瘤活性的研究.主要是做细胞方面的抗肿瘤研究.
  做的东西不多,实验也不是非常顺利,希望能和大家共同探讨.

• guagua (2013-10-22 15:51:00)

  
  我也参与一下，我是做凝乳酶的提取纯化，没有什么技术含量。主要应用蛋白质的一般分离技术，先是乙醇分级沉淀，之后利用层析法进行纯化，研究其凝乳的机理，另外一方面是通过微生物发酵产凝乳酶，也是进行分离纯化。呵呵，本人学识浅薄，就凝乳酶的提取纯化就让我很挠头，希望大家多多帮忙，先谢了！

• xyw5 (2013-10-22 15:52:52)

  
  相关疾病：
  甲状腺功能亢进症心房颤动
  支持一下，和大家共同进步！谈谈以前和师兄一起参与的导师的课题。
  甲状腺功能亢进并发心房颤动时心房和肺静脉缝隙连接的改变
  1、腹腔注射左旋甲状腺素建立兔甲状腺功能亢进模型。
  2、甲状腺功能亢进兔行快速心房起搏建立心房颤动模型。
  3、Western blot观察心房和肺静脉缝隙连接蛋白CX43、CX40蛋白的变化。
  4、RT-PCR观察心房和肺静脉缝隙连接蛋白CX43、CX40 mRNA的变化。
  5、用免疫荧光抗体标记激光共聚焦显微镜检测心房和肺静脉Cx43和Cx40的分布。

• wu11998866 (2013-10-22 15:53:50)

  
  我做一蛋白与DNA-pol相互作用的
  1. 先Western 检测Hela 中DNA-pol 内源性含量
  2. 带标签的该蛋白质粒转入Hela (无市售该蛋白抗体)
  3. Western 证实外源转入基因表达情况
  4. IP

• duoduo (2013-10-22 15:54:10)

  
  我做PP150的载体构建,表达,发酵,纯化,鉴定,及后续开发
  主要所用的方法就是蛋白方面常用的方法,比如PCR, 酶切,连接,转化,发酵,纯化,weston-blot,ELISA等!

• qianqin1977 (2013-10-22 15:54:50)

  
  我做不同活力的杂交水稻的差异蛋白质,样品多,工作量大,做二向估计是做不成的了,直接做了SDS-PAGE 后上质谱,现在正在预备实验中.

• 98776langtao (2013-10-22 15:55:13)

  
  我来说说吧，希望能得到dxy宝贵的第一分：
  我是构建了一个炎症因子HMGB1的6种突变体蛋白，从中筛选出能与THP-1细胞膜上HMGB1蛋白受体结合但不产生炎症效应的突变体蛋白，从而竞争性抑制HMGB1的炎症作用。
  1、从人扁桃体组织中提取总RNA，通过反转录PCR得到cDNA。
  2、构建突变体：一步反向PCR引入突变，构建六种突变体，构建到质粒pUC18中。
  3、酶切目的片段构建到原核表达质粒pQE80L中，表达出蛋白并用western blot鉴定。
  4、蛋白纯化。
  5、激光共聚焦显微镜筛选出只与受体结合不产生炎症效应的突变体蛋白。
  6、细胞实验观察筛选出的蛋白抑制炎症的效应。
  7、小鼠实验观察筛选出的蛋白抑制炎症的效应。