伴刀豆球蛋白亲和色谱柱的制备及其在糖蛋白核糖核酸酶B 结构分析中的应用

摘要:通过对硅胶基质进行化学改性键合伴刀豆球蛋白(Con A) ,制备了对糖蛋白具有特异亲和作用的亲和色谱固定相;该固定相非特异性吸附弱,对于糖蛋白和糖肽的分离效果良好。对亲和色谱的分离条件进行了优化,以标准糖蛋白核糖核酸酶B (RN ase B )为模型,对其进行了纯化;用糖苷酶切除糖链,并对切除糖链前后的RN ase B 用胰蛋白酶酶解;用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALD I2TO F MS )对亲和色谱分离得到的糖蛋白、糖链及糖肽进行了分析,确定了RN ase B 的一级结构、糖含量、糖基化位点及糖连接方式。该方法快速准确,适于糖蛋白和糖肽的分离表征。将其应用于血清中糖蛋白及酶解后血清中糖肽的分离富集,取得了很好的效果。