抑制黄嘌呤氧化酶活性的化合物筛选研究

在人类等灵长类哺乳动物中，黄嘌呤氧化酶功能异常造成的高尿酸血症是造成痛风的主要原因，进行抑制黄嘌呤氧化酶活性的化合物活性测试和筛选研究对于医药研发较为重要。因为其作为一个主要的氧化酶产生超氧自由基和过氧化氢分子，它们升高或造成氧化应激损伤、代谢综合征和诸如高血压等心血管疾病和缺血在灌注损伤。在基础医学理论研究中，黄嘌呤氧化酶被用于探讨自由基分子损伤机理发生、先天免疫诱发炎症及杀菌作用的模型酶和通风治疗的靶点酶。

黄嘌呤氧化酶可用于痛风、心肌梗塞和细胞损伤后次黄嘌呤和黄嘌呤水平的检测，其酶活性测试主要采用NBT/MTS-PMS比色法、紫外分光光度法、电化学法及放射化学法等方法。许多研究发现一些植物化学成分对黄嘌呤氧化酶具有很强的抑制作用，进行化合物筛选或者进一步通过动物实验及临床研究寻找对黄嘌呤氧化酶具有抑制作用的化合物，对研发安全有效的痛风治疗制剂至关重要。化合物筛选有助于发现具有特定生物活性的新型化学物质，离开了筛选，新药的研究开发就将成为无源之水。美迪西生物医药是一家临床前CRO公司，是集化合物合成、化合物活性筛选、结构生物学、药效学评价、药代学评价和毒理学评价为一体的符合国际标准的综合技术服务平台。

1、HPLC法在抑制黄嘌呤氧化酶活性的化合物筛选研究

有研究者建立了HPLC法体外筛选黄嘌呤氧化酶抑制剂的方法，采用HPLC法测定酶促反应体系中底物黄嘌呤在反应前后含量的变化，以此考察待测样品对黄嘌呤氧化酶的抑制作用。色谱条件:AgilentSB-C_(18)柱，4.6mm×250mm，5μm；流动相，0.02mol•L~(-1)KH_2PO_4(含甲醇1%)；流速，1.0mL•min~(-1)；进样量，20μL；柱温，室温；检测波长，254mm。

结果在该色谱条件下，酶促反应体系中的黄嘌呤与其它成分分离度良好。利用该方法对14种中药进行了筛选，发现使君子、苏木、虎杖和丹皮四味中药的70%乙醇提取物对黄嘌呤氧化酶抑制作用较强。该方法简单可行，准确性较高，可用于黄嘌呤氧化酶抑制剂的快速筛选。

2、抑制黄嘌呤氧化酶活性的黄酮化合物筛选研究

还有研究者使用改良的HPLC法测定各黄酮抑制率，以从30种黄酮中筛选抑制黄嘌呤氧化酶活性的化合物。腹腔注射氧嗪酸钾诱导高尿酸血症小鼠模型后，磷钨酸法检测血清尿酸水平，分光光度法检测血清黄嘌呤氧化酶水平，脲酶法检测血清尿素氮水平，肌氨酸氧化酶法测血清肌酐水平。结果发现12种黄酮在120μmol/L浓度下、9种黄酮在60μmol/L浓度下对黄嘌呤氧化酶有抑制作用，以木犀草素、槲皮素、芹菜素、山柰酚作用最强，IC50值分别为42.02、120.22、135.98、184.36μmol/L。与模型组比较，木犀草素组(20、40、80mg/kg)、芹菜素组(200mg/kg)、山柰酚组(150、300mg/kg)尿酸、黄嘌呤氧化酶、尿素氮、肌酐水平显著降低(P<0.05，P<0.01)。

结果发现3种黄酮(木犀草素、山柰酚、芹菜素)可明显抑制黄嘌呤氧化酶活性，从而呈现出降尿酸作用。

筛选抑制黄嘌呤氧化酶酶活的化合物方法主要包括紫外分光光度法、电化学法和超高效液相色谱法等，建立了一种基于HPLC的体外筛选黄嘌呤氧化酶抑制剂的方法，即以酶促反应体系中底物黄嘌呤在反应前后含量的变化为指标，考察待测样品对黄嘌呤氧化酶的抑制作用的方法可行度较高，可以作为抑制黄嘌呤氧化酶的化合物筛选研究。