TMT（Isobaric tandem mass tag）是由Thermo Scientific公司推出的一种等重同位素标记技术，目前有2标、6标和10标三种试剂，可分别用于对6种或10种不同实验条件的样品进行标记和同时检测。

技术原理

TMT在原理上与iTRAQ技术相同，标记试剂的分子结构也由3部分组成：报告基团（report group）、平衡基团（balance group）和肽反应基团（amine-specific reactive group）。NHS可与肽片段N端的氨基及赖氨酸的ε-氨基高效反应，对样品中几乎全部肽片段进行TMT标记。报告基团和质量平衡基团中含有不同量的13C、15N和18O稳定同位素，使得这两部分总体具有相同的质量。以6标方法为例，标记后，来自不同样品的相同肽片段在一级质谱（MS1）中具有相同的m/z，在二级质谱（MS2）中肽片段经碰撞碎裂（CID或HCD）后释放出不同标记的报告离子，m/z 分别为126、127、128、129、130和131，根据不同报告离子的信号强度，可以对不同样品间的蛋白进行定量比较。

技术优势

• 一次实验中可同时标记2-10组样本；

• 可用于动物、植物、微生物、临床、体液或细胞等多种样本标记，几乎适用于所有类型的生物样本；

• 重现性好、灵敏度高、定性与定量可同时进行；

• 检测限低，可检测出低丰度蛋白；

应用领域

• 基础医学、临床诊断：生物标志物，疾病机理机制，疾病分型，个性化治疗等；

• 生物医药：药物作用机理，药效评价，药物开发等；

• 农林领域：抗逆胁迫机制，生长发育机制，育种保护研究等；

• 畜牧业：肉类及乳品质研究，致病机理研究等；

• 微生物领域：致病机理，耐药机制，病原体-宿主相互作用研究等；

• 海洋水产：渔业资源，海水养殖，渔业环境与水产品安全等；

• 生物能源、环境科学领域：发酵过程优化，生物燃料生产，环境危定风险评估研究等；

• 食品营养：食品储藏及加工条件优化，食品组分及品质鉴定，功能性食品开发，食品安全监检测等。

样品要求

• 组织类型：动物组织≥100mg、植物组织≥100mg、微生物≥20mg；

• 细胞样品：每样品细胞量 ≥ 1X10⁷

• 蛋白提取物：≥100µg

• 体液：血清/血浆≥200µL、尿液≥1ml、唾液/脑脊液≥1ml、泪液≥1mL、支气管灌洗液≥3ml；

• 外泌体：≥10µL

• FFPE石蜡包埋切片：≥0.3 mm * 0.3 mm

参考文献

[1]. Thompson, A, et al. Tandem mass tags: a novel quantification strategy for comparative analysis of complex protein mixtures by MS/MS. Anal Chem. 2003; 75(8):1895-1904.

[2]. Dayon, L, et al. Relative quantification of proteins in human cerebrospinal fluids by MS/MS using 6-plex isobaric tags. Anal Chem. 2008; 80(8):2921-31.

[3]. Zhuang, G, et al. Phosphoproteomic analysis implicates the mTORC2-FoxO1 axis in VEGF signaling and feedback activation of receptor tyrosine kinases. Sci Signal. 2013; 16; 6(271):ra25.

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